人骨髓間充質干細胞神經元樣分化中自噬相關基因Beclin-1的表達的初步研究.pdf

1、目的:
　　1.在實驗室中分離培養(yǎng)人骨髓間充質干細胞,觀察其生長。
　　2.利用堿性成纖維細胞生長因子及上皮生長因子誘導人骨髓間充質干細胞神經元樣細胞分化,觀察神經元樣分化中細胞形態(tài)等一系列變化。
　　3.初步檢測人骨髓間充質干細胞神經元樣細胞分化過程中自噬相關基因表達的變化,探討該基因及其相關意義。
　　方法:
　　1.在患者知情條件下抽取骨髓,以肝素抗凝,以Ficoll-Paque密度梯度離心法(無菌通

2、風柜內操作)來獲得人單個核細胞,倒置顯微鏡下進行細胞計數(shù)后,以1.0×106/L的細胞濃度接種于6孔板,72 h換液1次并去除未貼壁細胞,直到貼壁細胞的融合率大于80％時傳代培養(yǎng),傳代比例為1∶2。2.傳代培養(yǎng)至細胞狀態(tài)穩(wěn)定后,接種到預鋪多聚賴氨酸的玻片上。等到細胞融合率大于50%時,采用堿性成纖維細胞生長因子開始預誘導神經元樣分化的進行。
　　3.利用表皮生長因子誘導人骨髓間充質干細胞分化為神經元樣細胞,觀察其形態(tài)變化及生長情況

3、。
　　4.免疫細胞化學法檢測神經元特異性烯醇化酶等表達,采用Western blot初步檢測誘導前后人骨髓間充質干細胞自噬相關基因 Beclin-1表達的變化。
　　結果與結論:
　　1.人骨髓間充質干細胞可以于體外培養(yǎng)存活一定時間,并可以于體外環(huán)境中接受一定程度的預處理。
　　2.經預誘導及誘導后,人骨髓間充質干細胞呈典型神經元樣細胞分化,神經元特異性烯醇化酶陽性率為78.7%。
　　3.誘導0.5 h