自噬基因Beclin-1在激素股骨頭缺血壞死中的作用及3-MA對(duì)其影響.pdf

1、目的：應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素引起的激素性股骨頭缺血壞死(Steroid-induced avascular necrosis of femoral head，SANFH)具有復(fù)雜的生物學(xué)過程，其發(fā)病機(jī)制仍不清楚。自噬型細(xì)胞死亡已成為近年來醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究組織器官衰老、死亡、損傷等發(fā)病機(jī)制的重要研究方向。我們的前期研究結(jié)果表明：激素對(duì)股骨頭節(jié)段血管中PDGF與VEGF的抑制而引起的缺血缺氧狀態(tài)及其眾多差異表達(dá)基因的調(diào)控與SANFH發(fā)生存在關(guān)聯(lián)性。

2、推測(cè)由激素導(dǎo)致SANFH發(fā)生過程中極有可能存在細(xì)胞自噬型死亡這一生物學(xué)特性。
　　方法：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)的日本大耳白兔隨機(jī)分成三組。對(duì)照組：?jiǎn)渭兗∪庾⑸渖睇}水，2ml/只/次；SANFH組：肌肉注射甲基強(qiáng)的松龍，4mg/kg；3-MA治療組：肌肉注射甲基強(qiáng)的松龍，4mg/kg，并于注射甲基強(qiáng)的松龍后隨即肌肉注射3-MA2ul/只。共4次，間隔一周，分別將每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于一周、二周、三周、四周處死，取股骨頭標(biāo)本。利用HE染色計(jì)數(shù)空缺骨陷窩，

3、透射電鏡檢測(cè)骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞自噬型細(xì)胞死亡情況，RT-PCR、Western Blot檢測(cè)Beclin1的mRNA與蛋白表達(dá)，免疫熒光檢測(cè)GFP-Beclin1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：RT-PCR：SANFH組股骨頭組織中Beclin1mRNA呈高表達(dá)，3-MA治療組Beclin1mRNA表達(dá)量較SANFH組均降低。Western Blot：實(shí)驗(yàn)的第一周、第二周SANFH組股骨頭組織中Beclin1蛋白高表達(dá)，3-MA治療組Becl

4、in1蛋白表達(dá)較其明顯下降。免疫熒光染色：SANFH組骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞的GFP-Beclin1融合蛋白表達(dá)均較對(duì)照組升高，給予3-MA后可以部分減弱GFP-Beclin1融合蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論：骨細(xì)胞及成骨細(xì)胞的自噬型細(xì)胞死亡可能與SANFH關(guān)系密切。Beclin1基因表達(dá)增強(qiáng)很可能在骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞自噬型細(xì)胞死亡中起著某種重要的作用；3-MA對(duì)于SANFH中自噬型細(xì)胞死亡可能起到抑制作用。通過3-MA抑制Beclin1基因表達(dá)