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文檔簡介
1、目的:
1.體外調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)P糖蛋白功能,觀察其對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的MSCs成脂分化影響。
2.體內(nèi)調(diào)控SD大鼠P糖蛋白功能探索激素性股骨頭壞死病理機制,研究通過外周血單個核細胞(PBMC)P糖蛋白功能檢測作為激素性股骨頭壞死預(yù)測指標的可行性。
3.研究通過增強P糖蛋白功能預(yù)防激素性股骨頭壞死的可行性。
方法:
1.分離培養(yǎng)、擴增SD大鼠MSCs,1
2、0ug/ml維拉帕米和5ug/ml利福平調(diào)控P糖蛋白功能。在P糖蛋白功能減弱或增強基礎(chǔ)上,10-6mol/L地塞米松(DEX)誘導(dǎo)MSCs成脂分化7天,檢測胞內(nèi)甘油三酯(TG)含量和堿性磷酸酶(AKP)活力變化。
2.25mg/kg/d維拉帕米腹腔注射1周,分離SD大鼠外周血單個核細胞(PBMCs)檢測P糖蛋白功能變化。P糖蛋白功能減弱的基礎(chǔ)上加用21mg/kg/d甲基強的松龍(MPSL)皮下注射4周。第5周經(jīng)血脂和磁共振
3、(MRI)檢查處死取股骨頭行組織學(xué)和免疫組化分析。
3.10mg/kg/a利福平灌胃1周,分離SD大鼠外周血單個核細胞(PBMCs)檢測P糖蛋白功能變化。P糖蛋白功能上調(diào)或下調(diào)基礎(chǔ)上加用21me/kg/dMPSL皮下注射4周。第5周經(jīng)血脂和磁共振(MRI)檢查處死取股骨頭行組織形態(tài)學(xué)分析。
結(jié)果:
1.維拉帕米/利福平分別上調(diào)/下調(diào)MSCs的P糖蛋白功能。無DEX作用下,單純P糖蛋白功能變化不影
4、響MSCs分化。在DEX作用下,MSC增大變圓,TG(14.03±0.66)和AKP(199.80±68.75)升高。P糖蛋白功能減弱,DEX誘導(dǎo)的TG(16.46±0.50:P<0.01)進一步升高,AKP(60.00±26.24;P<0.01)較前下降。P糖蛋白功能增強,DEX誘導(dǎo)的TG(12.50±0.70:P<0.01)減少,AKP(44.40±13.78;P<0.01)下降。
2.維拉帕米體內(nèi)應(yīng)用減弱SD大鼠PB
5、MC的P糖蛋白功能。無MPSL作用下,維拉帕米組TG高于生理鹽水對照組。股骨頭MRI和組織學(xué)檢查與生理鹽水對照組無差異。MPSL作用下,MRI示股骨頭內(nèi)T1、T2信號對應(yīng)異常增高,股骨頭壞死率(80%);組織學(xué)示脂肪細胞數(shù)量和體積增加;骨小梁面積減少。加用維拉帕米后,股骨頭MRI異常信號范圍增加;脂肪細胞數(shù)量和體積進一步增加;骨小梁面積進一步減小;股骨頭壞死率(100%,P<0.05)升高。
3.利福平體內(nèi)應(yīng)用增強SD大鼠
6、PBMC的P糖蛋白功能。無MPSL作用下,利福平組TG高于生理鹽水對照組。股骨頭MRI和組織學(xué)檢查與生理鹽水對照組無差異。MPSL作用下,MRI示股骨頭內(nèi)T1、T2信號對應(yīng)異常增高,股骨頭壞死率(80%);組織學(xué)示脂肪細胞數(shù)量和體積增加;骨小梁面積減少。聯(lián)用利福平后,股骨頭MRI異常信號范圍減少;脂肪細胞數(shù)量和體積縮小;骨小梁面積與對照組無差異;股骨頭壞死率(50%,P<0.05)降低。
結(jié)論:
1.P糖蛋白
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