類胰島素生長因子-1-胰島素的不同折疊行為主要是由它們各自的兩個(gè)殘基(Thr4-B5His和Glu9-B10His)決定的.pdf

1、蛋白質(zhì)是一類重要的生物大分子，它幾乎存在于生命活動(dòng)的所有過程之中。蛋白質(zhì)在合成的過程中，首先從mRNA翻譯產(chǎn)生線狀的多肽鏈(一級(jí)結(jié)構(gòu))，然后再折疊形成特定的三維結(jié)構(gòu)，這種從一級(jí)結(jié)構(gòu)到三維結(jié)構(gòu)的過程，就是蛋白質(zhì)的折疊。早期的研究認(rèn)為，形成蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)的信息貯存于一級(jí)結(jié)構(gòu)之中，一個(gè)一級(jí)結(jié)構(gòu)決定唯一的高級(jí)結(jié)構(gòu)，然而，一些“一序列、多結(jié)構(gòu)”現(xiàn)象的出現(xiàn)，正不斷挑戰(zhàn)著“一序列、一結(jié)構(gòu)”理論的地位，最具代表性的就是朊病毒。本實(shí)驗(yàn)中的類胰島素生長因子

2、-1(IGF-1)也是這樣一種“一序列、多結(jié)構(gòu)”的分子，它能同時(shí)折疊形成兩種熱力學(xué)穩(wěn)定的高級(jí)結(jié)構(gòu)：天然IGF-1和錯(cuò)配IGF-1；而與IGF-1有很高的序列同源性、相似的三維結(jié)構(gòu)和共同祖先分子的胰島素，卻只折疊形成一種熱力學(xué)穩(wěn)定的高級(jí)結(jié)構(gòu)，胰島素和IGF-1的不同折疊行為正是本文所要探討的問題。胰島素由B-和A-兩條獨(dú)立的鏈組成，為方便研究我們構(gòu)建了模型肽豬胰島素前體(porcin.insuli.precursor，PIP)：即把豬胰島

3、素的B-鏈C末端和A-鏈N末端用二肽AK相連接，而形成的重組單鏈胰島素，它和胰島素一樣只折疊產(chǎn)生一種熱力學(xué)穩(wěn)定的高級(jí)結(jié)構(gòu)。在該模型肽的基礎(chǔ)上，并根據(jù)關(guān)于“胰島素和IGF-1不同折疊行為”的研究進(jìn)展，實(shí)驗(yàn)中共構(gòu)建了三個(gè)模型肽：(desBIF)[BlOE]PIP、[B5T，B10E]PIP和(desBIF)[B5T，B10E]PIP，并對(duì)它們進(jìn)行了表達(dá)純化、質(zhì)譜鑒定、二硫鍵重排和還原再折疊等方面的研究。結(jié)果證明，(desB1F)[B10E]