全反式維甲酸一般藥理學、急性毒性和長期毒性研究.pdf

1、全反式維甲酸(All-trans-retinoic acid，ATRA)是維生素A類衍生物，在臨床上被用于急性白血病的治療，可明顯促進白血病細胞分化并抑制其增殖。有研究證實，在肺癌、前列腺癌、乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)母細胞瘤以及皮膚癌等多種癌癥中，ATRA都發(fā)揮了一定的治療作用。近年來的研究證實，ATRA與某些藥物聯(lián)用也有很好的療效。然而在臨床應用中也發(fā)現(xiàn)ATRA具有較大的副作用和臨床反應，主要包括口唇、皮膚干燥伴脫屑、消化道反應、頭痛

2、、頭暈、關(guān)節(jié)酸痛等。這些副作用和臨床反應極大的限制了ATRA的臨床應用。本研究第一部分旨在觀察研究灌胃給予全反式維甲酸對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響，確定全反式維甲酸出現(xiàn)非期望的藥物效應，評價其在毒理學或臨床研究中觀察到的藥物不良反應或病理生理作用，研究所觀察到的或推測的藥物不良反應機制。第二和第三部分旨在研究灌胃給予全反式維甲酸對大鼠產(chǎn)生的急性和長期毒性作用，評價口服全反式維甲酸的安全性，為臨床用藥的安全性評價提供參考。據(jù)此，為ATRA的臨床應

3、用拓展思路，也期望為今后的研究提供有價值的研究資料。
　　第一部分、全反式維甲酸對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)作用的一般藥理試驗研究
　　目的：通過小鼠自主活動實驗、小鼠協(xié)調(diào)運動實驗、與閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同作用實驗考察全反式維甲酸（all-trans-retinoic acid，ATRA）對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響。
　　方法：ICR小鼠，雌雄各半，按體重隨機分為溶劑對照組、250.0mg/kg、50.0mg/kg、10.0mg/kg，各

4、組小鼠禁食（不禁水）12h后分別灌胃給予相應劑量ATRA，給藥體積為0.02ml/g。小鼠自主活動實驗，測定給藥前及給藥后60min、120min、180min小鼠在5min內(nèi)的活動次數(shù)。小鼠協(xié)調(diào)運動試驗，測定給藥后120min小鼠在轉(zhuǎn)棒上的停留時間。與閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同作用試驗，給藥后120min腹腔注射戊巴比妥鈉閾下裁量，觀察睡眠小鼠的例數(shù)。
　　結(jié)果：ATRA250.0mg/kg作用120min后，小鼠自主活動次數(shù)顯著減

5、少,給予50.0mg/kg、10.0mg/kgATRA120min、180min后均可見小鼠自主活動減少的趨勢;而250.0mg/kg、50.0mg/kg及10.0mg/kg ATRA對小鼠的協(xié)調(diào)運動均無明顯影響，與閾下劑量的戊巴比妥鈉無協(xié)同作用。
　　結(jié)論：ATRA能減少小鼠自主活動次數(shù)，對協(xié)調(diào)運動無明顯影響，與閾下劑量戊巴比妥鈉無協(xié)同作用。
　　第二部分、全反式維甲酸大鼠最大給藥量試驗研究
　　目的：考察灌胃最大給

6、藥量的全反式維甲酸對SD大鼠的毒性作用。初步評價口服全反式維甲酸的安全性，為后續(xù)研究提供參考依據(jù)。
　　方法：大鼠前日禁食8小時，次日灌胃給藥0.02ml/g，給藥后即刻觀察其出現(xiàn)的毒性反應，1h后給予食物，3h后第二次灌胃給藥0.02ml/g，給藥后觀察其出現(xiàn)的毒性反應，至14日后大鼠解剖作肉眼觀檢。體重采用T檢驗方法進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：給藥后，大鼠外觀、行為、反應、分泌物及排泄物等指標均未見異常，至給藥后4日，除部

7、分大鼠眼觀可見雙眼瞼有出血現(xiàn)象，其余各指標均未見異常，亦未有大鼠死亡。ATRA組給藥后3日內(nèi)，雌、雄大鼠較溶劑對照組體重均有明顯減輕，3日后，雌、雄大鼠體重均有所回升，雄鼠生長速度高于雌性大鼠，試驗末期ATRA組雌、雄大鼠體重較溶劑對照組仍然較輕。試驗終期對大鼠進行剖解，各主要臟器均未見明顯異常。
　　結(jié)論：ATRA4.0g/kg未引起大鼠死亡，對大鼠臟器無明顯異常影響，但對大鼠體重有明顯的影響。
　　第三部分、全反式維甲酸

8、大鼠長期毒性試驗研究
　　目的：觀察大鼠在連續(xù)1個月灌胃全反式維甲酸后，是否出現(xiàn)毒性反應，劑量與毒性效應的關(guān)系，主要靶器官，毒性反應的性質(zhì)和程度，毒性反應的可逆性等;明確動物的無毒反應劑量，毒性反應劑量及安全范圍;確定無毒反應劑量及臨床上主要檢測指標，為臨床用藥的安全性評價提供參考。
　　方法：選取檢疫合格的大鼠100只，體重為160-180g，雌雄各半，按體重隨機分為5組，分別為溶劑對照組、ATRA750.0mg/kg劑量

9、組、ATRA250.0mg/kg劑量組、ATRA50.0mg/kg劑量組，ATRA10.0mg/kg劑量組，每組20只。各劑量組大鼠每天上午灌胃給予相應劑量的藥液，給藥容積為0.01ml/g，溶劑對照組給予等容積的0.5％CMC-Na溶液，連續(xù)給藥1個月，恢復期為2周。在此期間進行觀察，指標有:癥狀、體重、攝食量、血液學及凝血功能檢查、血液生化學檢查、系統(tǒng)解剖、臟器系數(shù)和病理組織學檢查。
　　結(jié)果：給藥組大鼠體重和每日攝食量平均值

10、均較溶劑對照組有明顯減輕，給藥期內(nèi)體重的增長速度也明顯較溶劑對照組緩慢?；謴推诟鹘o藥組大鼠體重和每日攝食量均有明顯回升。給藥期內(nèi)，雌鼠與溶劑對照組比較，紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細胞壓積比值和紅細胞含量均有明顯降低，呈劑量依賴性關(guān)系。雄鼠與溶劑對照組比較，250.0mg/kg和50.0mg/kg組血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度、紅細胞平均血紅蛋白濃度明顯降低，50.0mg/kg組網(wǎng)狀紅細胞數(shù)、網(wǎng)狀紅細胞百分率明顯上升。10.0mg/kg

11、組白細胞數(shù)、淋巴細胞數(shù)有明顯增加。部分活化凝血酶原時間，給藥組大鼠較對照組均有延長，但僅10.0mg/kg組雄鼠有顯著性差異。凝血酶原比率給藥組大鼠均較對照組有所降低。凝血酶原時間和凝血酶原國際標準化比值給藥組大鼠均較正常組有所升高，但僅10.0mg/kg組雄鼠有顯著性差異。凝血酶時間雄鼠有下降的趨勢并與劑量一致，雌鼠250.0mg/kg組和50.0mg/kg組較溶劑對照組有明顯降低。給藥期雌鼠總蛋白含量、白蛋白含量有明顯降低，呈劑量相

12、關(guān)性。給藥組堿性磷酸酶、血糖濃度、甘油三酯均較溶劑對照組有明顯升高，堿性磷酸酶和甘油三酯的變化呈劑量相關(guān)性。給藥期雄鼠白蛋白含量有明顯降低，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、甘油三酯有明顯升高。經(jīng)過兩周的恢復期，各給藥組雌雄大鼠各項指標均較給藥期有好轉(zhuǎn)。雌鼠250.0mg/kg組脾臟、肝臟、腎臟、腎上腺、心臟、腦的臟器系數(shù)有顯著升高，胸腺臟器系數(shù)有顯著降低;50.0mg/kg組的肝臟、腎上腺的臟器系數(shù)有明顯升高;腎臟的臟器系數(shù)有明顯升高，胸腺臟器系數(shù)有顯著降

13、低。雄鼠250.0mg/kg組脾臟、肝臟、腎臟、腎上腺、肺臟、心臟、腦的臟器系數(shù)有顯著升高;50.0mg/kg和10.0mg/kg組的肝臟有顯著提高。給藥后5天750.0mg/kg組大鼠即陸續(xù)出現(xiàn)下頜脫毛、口鼻有血樣分泌物、弓背、自主活動減少，步態(tài)不穩(wěn)、呼吸急促等癥狀。給藥14天后處于瀕死狀態(tài)，陸續(xù)死亡。250.0mg/kg組大鼠給藥18天后陸續(xù)出現(xiàn)自主活動減少、眼瞼脫毛出血、四肢無力等癥狀，后雌性動物未死亡，雄性組共死亡4只動物。50

14、.0mg/kg組和10.0mg/kg組行為外觀情況較為正常。250.0mg/kg、50.0mg/kg、10.0mg/kg三個劑量組均出現(xiàn)肝細胞水腫，十二指腸黏膜上皮變性、壞死，脾臟巨核細胞增多;250.0mg/kg劑量組動物胸腺出現(xiàn)皮質(zhì)細胞減少;肝臟髓外造血和胸腺皮質(zhì)細胞點狀壞死出現(xiàn)于250.0mg/kg和50.0mg/kg劑量組;250.0mg/kg劑量組還出現(xiàn)睪丸曲精細管萎縮、生精細胞減少，部分動物出現(xiàn)毛囊減少。在恢復期，各組均出現(xiàn)