脂肪細胞膜相關蛋白在妊娠期糖尿病胰島素抵抗中的作用及其機制研究.pdf

1、目的：評估妊娠期糖尿病(GDM)患者孕期及產(chǎn)后6-8周胰島β細胞功能和胰島素抵抗狀態(tài)，探索GDM患者產(chǎn)后胰島素抵抗的影響因素。同時應用非標記定量蛋白質(zhì)組學的方法比較妊娠期糖尿病患者和糖代謝正常孕婦網(wǎng)膜脂肪組織蛋白的表達差異，找尋妊娠期糖尿病胰島素抵抗的干預靶點。最后，利用3 T3-L1脂肪細胞模型在體外模擬 GDM孕婦脂肪組織，探索蛋白質(zhì)組學鑒定到的差異蛋白脂肪細胞膜相關蛋白(APMAP)在胰島素抵抗中的作用。
　　方法：納入來我

2、院產(chǎn)檢的孕周匹配的GDM孕婦和糖耐量正常(NGT)的孕婦各60例。比較兩組一般資料、胰島β細胞功能和胰島素抵抗狀態(tài)；同時納入產(chǎn)后6-8周來我院隨訪的有GDM病史的患者223例，行75g口服葡萄糖耐量試驗。觀察GDM患者產(chǎn)后6-8周的臨床轉歸；比較GDM產(chǎn)后糖代謝正常和糖代謝異?；颊?、產(chǎn)后糖尿病和糖尿病前期患者的一般資料、胰島β細胞功能和胰島素抵抗狀態(tài)。最后利用多重線性回歸分析找尋GDM產(chǎn)后胰島素抵抗的獨立影響因素；蛋白質(zhì)組學檢測樣品來源

3、于我院接受剖宮產(chǎn)手術的GDM和NGT孕婦各6例，術中留取腹部網(wǎng)膜脂肪組織。脂肪組織經(jīng)過裂解、蛋白定量后，利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析獲取肽段質(zhì)譜圖。運用Maxquant分析軟件對結果進行分析，獲取蛋白質(zhì)信息并進行基因注釋和功能分類，同時計算表達差異的蛋白。最后挑選表達差異較大的蛋白APMAP利用Western blot和免疫組化進行驗證；體外試驗，將3T3-L1前脂肪細胞誘導分化為成熟脂肪細胞，分化過程第2、4、6、8天檢測APMAP的表達

4、量。在APMAP表達穩(wěn)定后利用siRNA干擾的方法特異性抑制脂肪細胞APMAP的表達并進行驗證。利用Western blot的方法檢測抑制 APMAP表達后對脂肪細胞胰島素信號轉導通路及 NFκB炎癥通路的影響。
　　結果：孕24-28周時，GDM孕婦與NGT孕婦胰島素分泌指數(shù)(HOMA-β)無明顯差異，GDM孕婦胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)明顯高于NGT孕婦；48.4%的GDM患者在產(chǎn)后6-8周仍存在不同程度的糖代謝異常；G

5、DM患者產(chǎn)后6-8周糖代謝異常的患者HOMA-β無明顯變化，但 HOMA-IR較高(P＜0.01)；多元逐步回歸分析結果顯示低齡生育，產(chǎn)后高BMI，低密度脂蛋白(LDL-C)、2小時血糖和1小時胰島素水平升高以及有糖尿病家族史是GDM產(chǎn)后胰島素抵抗的獨立危險因素；蛋白質(zhì)組學結果共鑒定蛋白3528個，差異表達蛋白66個。其中47個在GDM患者網(wǎng)膜脂肪組織中表達下調(diào)，19個表達上調(diào)，APMAP是其中下調(diào)較明顯的蛋白之一；細胞定位結果顯示鑒定

6、到的蛋白中68.2%為細胞質(zhì)蛋白，15%為膜蛋白；免疫組化結果證實APMAP屬于膜蛋白，Western blot結果也顯示APMAP在GDM孕婦脂肪組織中表達明顯下調(diào)；體外試驗中，APMAP的表達量從脂肪細胞分化的第2天到第6天逐漸增加，至第6-8天趨于穩(wěn)定；在成熟的3T3-L1脂肪細胞中抑制 APMAP的表達，IRS-1和 Akt表達無明顯變化，但胰島素刺激后p-IRS-1和p-Akt表達較正常對照組明顯減少。同時，抑制APMAP表達

7、后，脂肪細胞p65表達無明顯變化，p-p65較對照組明顯增多。
　　結論：胰島素抵抗是GDM孕期及產(chǎn)后糖代謝異常主要病理生理基礎。48.4%的GDM患者產(chǎn)后6-8周存在糖代謝異常，加強產(chǎn)后糖篩查有助于2型糖尿病的早期發(fā)現(xiàn)和干預。通過生活方式的干預適當降低產(chǎn)后體重、血脂和血糖水平有助于緩解胰島素抵抗狀態(tài)。非標記定量蛋白質(zhì)組學適用于妊娠期糖尿病患者網(wǎng)膜脂肪組織的分析，蛋白檢出較多，膜蛋白覆蓋率較高，膜蛋白APMAP在GDM患者網(wǎng)膜脂肪