糖皮質激素受體在肝衰竭患者中的表達及其機制的初步探討.pdf

1、目的：探討慢加急性肝衰竭（ACLF）患者體內(nèi)糖皮質激素受體（GR）亞型的表達情況及與 ACLF患者預后的關系；并通過建立動物模型，研究 GR在肝衰竭時發(fā)生變化的分子機制，為臨床治療提供思路。
　　方法：
　　1.收集2015年6月至2016年3月期間在蘇州大學附屬第一醫(yī)院感染科住院的26例慢加急性肝衰竭病人及10例健康體檢者（HCs）EDTA抗凝血，采用RT-PCR檢測單個核細胞（PBMCs）內(nèi)GRa及GRβ的表達，比較兩組

2、的GRa及GRβ表達差異，以及ACLF死亡者與存活者GRa及GRβ表達差異，分析GR與預后的關系。
　　2.建立動物模型，將35只Balb/c小鼠隨機分成正常對照組（第1組）、慢性肝損害組（第2組）、肝衰竭組（第3組）、1mg/Kg甲強龍治療組（第4組）、2mg/Kg甲強龍治療組（第5組）。除了正常組外，其余四組采用食用油稀釋成20％的四氯化碳（CCl4）5ml/Kg腹腔注射，2次/周共8周，8周末第3、4、5組用D-氨基半乳糖<

3、br>　?。―-GalN）500mg/Kg及內(nèi)毒素（LPS）100ug/Kg腹腔注射，建立慢加急性肝衰竭模型，同時第4、5組分別用1mg/Kg及2mg/Kg甲強龍治療5天。
　　3.HE后染色觀察肝臟病理鑒定造模成功，并用免疫組化及Western blot檢測GRa及GRβ的表達情況。同時用Western blot測定p38MAPK信號通路的活化情況，分析p38MAPK信號通路在肝衰竭時與GR亞型改變的關系及對GR的調(diào)控。

4、　　結果：
　　1.與健康人相比，ACLF患者外周血單個核細胞的 GRαmRNA的表達水平降低（P<0.05），而 ACLF患者外周血單個核細胞的 GRβmRNA的表達水平卻高于健康人（P<0.05）。
　　2.ACLF好轉組外周血單個核細胞的GRαmRNA的表達水平高于死亡組（P<0.05），而GRβmRNA的表達水平無明顯差異（P>0.05）。
　　3.HE染色：8周后，第1組7只老鼠無死亡，肝臟表面光滑，肝細胞完

5、整，形態(tài)正常；第2組死亡2只，肝臟增大，表面粗糙，鏡下出現(xiàn)脂肪變及纖維化；第3組死亡3只，肝組織充血腫脹，肝細胞在纖維化的基礎上出現(xiàn)大塊及亞大塊壞死，中央靜脈及膽管周圍出現(xiàn)炎性細胞浸潤；第4、5組經(jīng)激素干預后均死亡1只，肝臟損傷的程度有所減輕。
　　4.免疫組化：GRa在5組老鼠肝細胞均有表達，肝衰竭組GRa的陽性細胞數(shù)最少，正常組>慢性肝損害組、激素治療組>肝衰竭組，而肝衰竭組GRβ陽性細胞數(shù)最多。
　　5.Western

6、 blot：GRa及GRβ的表達情況與免疫組化檢測的五組GRa及GRβ的表達的強弱趨勢相同。肝衰竭組老鼠肝臟磷酸化的p38MAPK表達量增加，經(jīng)激素干預后，磷酸化的p38MAPK表達量降低，且與GRa的改變相平行。
　　結論：
　　1.肝衰竭時 GRa表達降低而 GRβ的表達增高，可能與肝衰竭時的炎癥細胞因子顯著上調(diào) GRβ的表達，對GRa的作用較弱，而增高的GRβ可以與GRa結合成二聚體干擾其生物學活性。
　　2.A