糖皮質激素受體介導的激素性白內障形成機制的研究.pdf

1、目的：糖皮質激素廣泛應用于臨床疾病的治療。長期全身、局部應用糖皮質激素可導致激素性白內障，其發(fā)病機制尚不明確。目前已證實晶狀體上皮細胞存在糖皮質激素受體。糖皮質激素作用于人晶狀體上皮細胞后，與其受體結合，其激素受體復合物與相應靶基因的糖皮質激素反應元件（GRE）結合后調控大量靶基因的轉錄，進而影響相應靶基因的功能。其中主要涉及細胞膜的轉運和細胞骨架結構的改變等。晶狀體通過Na+，K+-ATP酶維持離子進出細胞的平衡，其功能的改變將會引起

2、晶狀體細胞內水鈉潴留，形成白內障。波形蛋白是重要的細胞骨架蛋白，在晶狀體上皮細胞中適量表達，對于維持晶狀體細胞正常的形態(tài)和功能，具有重要意義。本實驗將應用糖皮質激素受體拮抗劑RU486探討糖皮質激素受體介導的大鼠激素性白內障Na+，K+-ATP酶和波形蛋白的變化，探討糖皮質激素受體在激素性白內障的發(fā)病中的作用機制。
　　方法：大鼠透明晶狀體隨機分為對照組、糖皮質激素誘導的激素白內障組（地塞米松5μM）、糖皮質激素受體拮抗劑RU48

3、6組（地塞米松5μM+RU4865μM）。離體晶狀體孵育7天，倒置顯微鏡動態(tài)觀察晶狀體的透明度。HE染色分析三組晶狀體的組織形態(tài)學變化，分光光度計動態(tài)分析Na+，K+-ATP酶的活性，蛋白質印跡法和免疫組化法分析Na+，K+-ATP酶α1和波形蛋白的蛋白表達，RT-PCR分析Na+，K+-ATP酶α1和波形蛋白的mRNA表達。
　　結果：白內障組與其它兩組相比，晶狀體在第5天出現(xiàn)霧狀混濁（P<0.05），第7天霧狀混濁更明顯（P<

4、0.01），而對照組和拮抗劑組保持透明。白內障組與其它兩組相比，Na+，K+-ATP酶活性隨孵育時間的延長而逐漸下降（P<0.001），而對照組和拮抗劑組無明顯變化。HE染色顯示白內障組與對照組和拮抗劑組相比，晶狀體纖維結構排列紊亂，細胞間隙增寬。白內障組Na+，K+-ATP酶α1蛋白和mRNA表達下降，而對照組和拮抗劑組表達正常。白內障組波形蛋白的蛋白表達下降，而對照組和拮抗劑組表達正常。三組中波形蛋白mRNA表達無明顯改變。