胚胎干細(xì)胞和膀胱癌細(xì)胞中LIN28A抑制LAMP1蛋白表達(dá)的研究.pdf

1、【目的】：膀胱癌是臨床泌尿外科最常見的腫瘤之一，近年來，我國膀胱癌的發(fā)病率越來越呈現(xiàn)出上升的趨勢。膀胱癌的早期診斷和分子靶向一直是其治療的難點(diǎn)。越來越多的研究人員認(rèn)為，腫瘤細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells，ESCs）可能具有相似的功能狀態(tài)，此兩種細(xì)胞中存在一些基因的共表達(dá)。LIN28A是胚胎干細(xì)胞中調(diào)節(jié)細(xì)胞時序性和細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子之一，其長期被認(rèn)為是胚胎干細(xì)胞中蛋白翻譯的促進(jìn)劑。而LIN28A同時在許多腫瘤細(xì)

2、胞中表達(dá)并與人類腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其可參與到腫瘤細(xì)胞發(fā)育的各階段，包括細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲等。近年有文獻(xiàn)報(bào)道LIN28A對胚胎干細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）相關(guān)蛋白的翻譯起到抑制作用。本研究組選取LIN28A以及ER相關(guān)蛋白LAMP1作為研究對象，旨在驗(yàn)證LIN28A對LAMP1翻譯的影響并對比胚胎干細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞功能狀態(tài)的異同，同時研究LIN28A在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展中的病理生理功能，為膀胱癌早期診斷、靶向治療，研制新的基因藥物提供重要的

3、實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　【方法】：我們使用DNA電泳技術(shù)檢測LIN28A和LAMP1在膀胱癌細(xì)胞系（UM-UC3、5637、SW780）細(xì)胞中的表達(dá)，同時使用免疫熒光定位技術(shù)檢測它們在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的部位。使用RNAi技術(shù)在胚胎干細(xì)胞和膀胱癌細(xì)胞中敲減LIN28A后，用qRT-PCR和western blot實(shí)驗(yàn)分別在mRNA水平和蛋白水平驗(yàn)證LAMP1表達(dá)情況的改變；在三種膀胱癌細(xì)胞中使用免疫共沉淀（CO-IP）實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證體外LIN28A和

4、LAMP1的結(jié)合能力；使用CCK-8實(shí)驗(yàn)用來檢測LIN28A對膀胱癌細(xì)胞增殖的影響；Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)用來驗(yàn)證LIN28A對膀胱癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響。
　　【結(jié)果】：LIN28A和LAMP1在胚胎干細(xì)胞和人類膀胱癌細(xì)胞系（UM-UC3、5637、SW780）都表達(dá)，且主要都表達(dá)于細(xì)胞胞漿內(nèi)。胚胎干細(xì)胞和膀胱癌細(xì)胞中敲減LIIN28A后LAMP1 mRNA水平不發(fā)生改變，而其蛋白表達(dá)都增高。在三種膀胱癌細(xì)胞中使用 LIN

5、28A抗體都可以檢測到 LAMP1蛋白，反之亦然。轉(zhuǎn)染 LIN28A siRNA后，人類膀胱癌細(xì)胞系細(xì)胞UM-UC3、5637和SW780在24h后遷移率分別下降了52.5％(p＜0.005)、56.5%(p＜0.005)和45.3%(p＜0.005)；其在24h，48h和72h時的增殖率分別下降了7.9%(24h)、15.9%(48h)、25.0%(72h)(P＜0.05)；11.8%(24 h)、16.2%(48h)、15.9%(7

6、2h)(P＜0.05)；10.1%(24h)、15.7%(48h)、23.5%(72h)(P＜0.05)，而48h后細(xì)胞侵襲率分別下降了75.5%(p＜0.005)、53.5%(p＜0.005)和63.3%(p＜0.005)。
　　【結(jié)論】：LIN28A在胚胎干細(xì)胞和人類膀胱癌細(xì)胞系（UM-UC3、5637、SW780）細(xì)胞中具有相似的功能，其都可在不改變LAMP1 mRNA表達(dá)水平的情況下抑制LAMP1蛋白表達(dá)。LIN28A可促