重度創(chuàng)傷患者血清中谷氨酰胺含量檢測方法與臨床應用研究.pdf

1、本科室前期工作中發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜法能夠成功檢測出腸內制劑中谷氨酰胺(glutamine，Gln)的含量，峰面積與濃度在一定范圍內呈良好的線性關系。高效液相色譜法是一種經典的氨基酸檢測方法，結果穩(wěn)定性好，毛細管電泳是繼其之后一個新興的氨基酸檢測方法，操作簡便，試劑消耗少，分析速度快。基于此，本文利用經典高效液相色譜法與毛細管電泳法分別分離谷氨酰胺，選擇更具優(yōu)勢的毛細管電泳法檢測血清中的谷氨酰胺，其操作過程簡單，分離效率高，成本低，結果靈

2、敏可靠，進而應用于臨床檢測。
　　Gln在臨床疾病中的應用十分廣泛，近來的研究證實，Gln在創(chuàng)傷階段作為非常關鍵的信號分子，調節(jié)許多有關細胞防御與修復、代謝、信號轉導等基因的表達，激活胞內信號轉導通路，對細胞修復和免疫調節(jié)至關重要。由創(chuàng)傷所引發(fā)的Gln需求和相關變化，目前尚未得出結論性的數(shù)據(jù)。因此，應用現(xiàn)代方法對創(chuàng)傷狀態(tài)下Gln需要的評估是當務之急。因此，本文成功利用毛細管電泳法測定創(chuàng)傷患者血清中的谷氨酰胺含量，結果準確可靠。

3、r>　　一、高效液相色譜法與毛細管電泳法測定谷氨酰胺的方法比較
　　目的：建立一種準確、簡便、快速的方法用于測定血清及組織中谷氨酰胺的含量。
　　方法：兩種方法均以異硫氰酸苯酯作柱前衍生劑，在254 nm紫外波長處測定谷氨酰胺的含量。高效液相色譜法以反相C18柱為固定相，以50mmol/L醋酸鈉緩沖液(pH6.05)：乙腈=94:6為流動相進行洗脫。毛細管電泳法采用重力進樣，進樣高度25cm，進樣時間15s，彈性石英毛細管內

4、徑75μm，有效分離長度55cm，分離電壓15kV，以濃度20.00mmol/L，pH9.33的硼砂緩沖溶液、166.00mmol/L的十二烷基硫酸鈉(SDS)和乙腈按10:10:3比例配置作為電泳緩沖液進行分離。
　　結果：高效液相色譜法在0.03mmol/L-2.50mmol/L內線性關系良好(r=0.997)，線性回歸方程Y=72529x+4214.6。變異系數(shù)2.46％，回收率為82.16％～115.22％，計算所得谷氨酰

5、胺的檢出限為0.01mmol/L。毛細管電泳法谷氨酰胺線性范圍為0.03mmol/L～2.00mmol/L，線性回歸方程Y=19873X+37.82，相關系數(shù)0.996。變異系數(shù)2.37％，回收率92.29％～110.28％，計算所得谷氨酰胺的檢出限為0.01mmol/L。正常人血清中Gln平均含量是0.79±0.03mmol/L。
　　結論：高效液相色譜法與毛細管電泳法紫外檢測測定血清及組織中谷氨酰胺的含量方法準確可靠，毛細管電

6、泳法優(yōu)于高效液相色譜法，更適合谷氨酰胺的檢測。
　　二、重度創(chuàng)傷患者血清中谷氨酰胺的含量變化及與C反應蛋白的關系研究
　　目的：利用毛細管電泳紫外檢測重度創(chuàng)傷患者血清中谷氨酰胺含量以及觀察與C反應蛋白的關系。
　　方法：選擇18例重度創(chuàng)傷患者，創(chuàng)傷嚴重度評分法(ATS-ISS評分)(16～25)(創(chuàng)傷組)分別在術前1d及傷后7d、14d采集靜脈血制備血清，同期選擇我院正常健康體檢人群10例為對照組，同法制備血清。用毛細

7、管(75μm×55cm)，以硼砂(20mmol/L，pH9.33)、十二烷基硫酸鈉(166.00mmol/L)和乙腈按10:10:3配置緩沖液，異硫氰酸苯酯為衍生劑，電壓15kV，紫外吸收波長254nm，檢測兩組血清谷氨酰胺及C反應蛋白含量。
　　結果：谷氨酰胺濃度在0.03～2.00mmol/L范圍內線性范圍良好，線性回歸方程Y=19873X+37.82，相關系數(shù)為0.996；變異系數(shù)為2.37％，平均回收率范圍為92.29％～