谷氨酰胺對(duì)膿毒癥大鼠血清毒性作用的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究膿毒癥大鼠血清對(duì)巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，以及加入谷氨酰胺（Gln）對(duì)血漿該作用的影響，探討Gln在膿毒癥中的保護(hù)作用機(jī)制。 方法： 第一部分：SD大鼠18只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham）、膿毒癥組（CLP）、Gln處理組（GLN）。CLP和GLN組采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（CLP）制備大鼠膿毒癥模型，術(shù)后即刻從尾靜脈注射Gln 0.75g/kg（GLN組）或等量生理鹽水（CLP組）。6h后采血收集血清/血漿及肺

2、組織，并將血清與RAW264.7細(xì)胞孵育4h后收集上清液。鱟試劑法定量測(cè)定血漿內(nèi)毒素濃度；比色法檢測(cè)血漿D-乳酸和Gln水平。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定肺組織TNF-α水平及血清作用于RAW264.7細(xì)胞后上清液中TNF-α與IL-6的水平。 第二部分：在第一部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將各組大鼠血清與HUVEC細(xì)胞孵育8h后分別進(jìn)行CCK－8細(xì)胞計(jì)數(shù)、Hoechst33342/PI熒光染色實(shí)驗(yàn)，以及0h、12h、24h的劃痕實(shí)

3、驗(yàn)。 結(jié)果： 第一部分：CLP組血漿D-乳酸水平明顯高于GLN和Sham組，而GLN和Sham組無明顯差異；CLP組血漿中LPS濃度顯著高于Sham和GLN組，而GLN組LPS濃度又顯著高于Sham組；Sham、CLP和GLN三組間Gln含量均無明顯差別；CLP組肺組織中TNF-α濃度顯著高于Sham和GLN組，GLN組與Sham組之間無顯著差異。CLP組大鼠血清刺激RAW264.7細(xì)胞后TNF-α、IL-6釋放較之Sh

4、am組顯著升高，而加入GLN組大鼠血清后TNF-α、IL-6濃度較之CLP組明顯下降，GLN組與Sham組無明顯差異。 第二部分：CLP組HUVEC細(xì)胞的OD值顯著低于Sham組,而GLN組顯著高于CLP組，GLN組與Sham組之間無顯著差異；CLP組HUVEC細(xì)胞的壞死率顯著高于Sham組,而GLN組顯著低于CLP組。但GLN組也顯著高于Sham組；在0h各組細(xì)胞間的殘存距離無差別，在孵育12h和24h后CLP組細(xì)胞的殘存距離