基于衍生化-微順序注射光纖傳感異丙酚分析.pdf

1、目的：建立異丙酚衍生化方法提高紫外或熒光檢測(cè)靈敏度，應(yīng)用于血漿中異丙酚分析時(shí)避免血漿中內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。與微順序注射-閥上實(shí)驗(yàn)室（μSI-LOV）、光纖傳感技術(shù)相結(jié)合快速依次進(jìn)行異丙酚的衍生化與檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)異丙酚快速、自動(dòng)化、一體化分析。
　　方法：1.異丙酚的衍生化及分析：研究異丙酚與4-磺酸基氯化重氮苯偶合衍生化，反應(yīng)生成偶合產(chǎn)物用紫外可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)，通過(guò)單因素變量法對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行考察；研究丹磺酰氯（DNC-Cl）對(duì)異丙酚的

2、熒光衍生化，反應(yīng)后產(chǎn)物用熒光分光光度法測(cè)定，通過(guò)單因素變量法考察衍生化條件。建立基于重氮偶合衍生化-紫外可見(jiàn)分光光度法分析血漿中異丙酚并應(yīng)用于異丙酚模擬生物樣品分析。2.基于重氮偶合衍生-微順序注射光纖傳感異丙酚分析：將重氮偶合衍生化與μSI-LOV光纖傳感相結(jié)合，在μSI-LOV系統(tǒng)中完成衍生化反應(yīng)，產(chǎn)物通過(guò)光纖傳感檢測(cè)，用單因素變量法優(yōu)化相關(guān)實(shí)驗(yàn)條件；建立重氮偶合衍生化結(jié)合μSI-LOV光纖傳感分析血漿中異丙酚并應(yīng)用于異丙酚模擬生物

3、樣品分析以及活體大鼠血漿中異丙酚分析。
　　結(jié)果：1.異丙酚衍生化及分析：異丙酚重氮偶合衍生化后生成橙紅色偶合產(chǎn)物，最大吸收波長(zhǎng)（λmax）在483nm處，反應(yīng)條件確定為：用0.06mol/L鹽酸溶解對(duì)氨基苯磺酸并與亞硝酸鈉反應(yīng)5min生成濃度為5.780×10-4mol/L4-磺酸基氯化重氮苯再與異丙酚混合，加入濃度為0.7mo l/L的氫氧化鈉溶液，常溫反應(yīng)10 min為最佳。偶合產(chǎn)物在20 min內(nèi)穩(wěn)定；DNS-Cl對(duì)異丙酚

4、熒光衍生化后產(chǎn)物激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)（λex、λem）分別位于345、500nm，衍生化條件確定為：乙腈作為DNS-Cl、異丙酚的溶劑，DNS-Cl與異丙酚摩爾比為8:1，加入0.1mo l/mL氫氧化鈉溶液，溫度為60℃避光反應(yīng)5 min，產(chǎn)物需萃取，以環(huán)己烷為萃取溶劑萃取1 min結(jié)果最佳，產(chǎn)物在10 min內(nèi)基本保持穩(wěn)定；重氮偶合衍生化-紫外可見(jiàn)分光光度法分析血漿中異丙酚濃度范圍在6~21μg/mL呈良好線性關(guān)系（r=0.9960），在

5、高、中、低3個(gè)水平濃度平均方法回收率在102.9％~104.5%之間，精密度（RS D）4.1%~5.5%，方法重復(fù)性符合要求，并考察異丙酚前處理后在4小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。2.重氮偶合衍生結(jié)合μSI-LOV光纖傳感分析異丙酚最優(yōu)條件為：以50μL/s的流速順序吸入50μL約1.156×10-3mol/L4-磺酸基氯化重氮苯溶液，50μL異丙酚溶液，40μL0.2mol/LNaOH溶液到儲(chǔ)液管中無(wú)需停流，再反向以15μL/s流速打入流通池檢測(cè)

6、；重氮偶合衍生化結(jié)合μSI-LO V光纖傳感分析血漿中異丙酚濃度范圍在3~18μg/mL呈良好線性關(guān)系（r=0.9990），高、中、低3個(gè)濃度的平均方法回收率在89.8%~99.6%之間，精密度4.3%~5.4%，方法重復(fù)性符合要求，并考察異丙酚前處理后在4小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定；該法可測(cè)得給藥后10min內(nèi)活體大鼠血漿中異丙酚含量，通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證測(cè)定血漿中異丙酚濃度范圍在3~24μg/mL呈良好線性關(guān)系（r=0.9960），高、中、低3個(gè)濃度

7、的平均方法回收率在92.7%~105.5%之間，精密度（RSD）5.3%~7.5%。
　　結(jié)論：
　　1.異丙酚重氮偶合衍生化后吸收波長(zhǎng)紅移、吸光度值增加，反應(yīng)條件容易控制，反應(yīng)速度快；DNS-Cl對(duì)異丙酚衍生化后λex、λem紅移，熒光強(qiáng)度低，沒(méi)用于血漿中異丙酚分析，提供考察結(jié)果為后續(xù)研究提供參考；重氮偶合衍生-紫外可見(jiàn)分光光度法可用于分析血漿中異丙酚，避免血中內(nèi)源性物質(zhì)干擾，方法簡(jiǎn)便、快捷。
　　2.異丙酚重氮偶合