基于衍生化-微順序注射光纖傳感異丙酚分析.pdf

1、目的：建立異丙酚衍生化方法提高紫外或熒光檢測靈敏度，應用于血漿中異丙酚分析時避免血漿中內源性物質的干擾。與微順序注射-閥上實驗室（μSI-LOV）、光纖傳感技術相結合快速依次進行異丙酚的衍生化與檢測，實現異丙酚快速、自動化、一體化分析。
　　方法：1.異丙酚的衍生化及分析：研究異丙酚與4-磺酸基氯化重氮苯偶合衍生化，反應生成偶合產物用紫外可見分光光度法檢測，通過單因素變量法對反應條件進行考察；研究丹磺酰氯（DNC-Cl）對異丙酚的

2、熒光衍生化，反應后產物用熒光分光光度法測定，通過單因素變量法考察衍生化條件。建立基于重氮偶合衍生化-紫外可見分光光度法分析血漿中異丙酚并應用于異丙酚模擬生物樣品分析。2.基于重氮偶合衍生-微順序注射光纖傳感異丙酚分析：將重氮偶合衍生化與μSI-LOV光纖傳感相結合，在μSI-LOV系統(tǒng)中完成衍生化反應，產物通過光纖傳感檢測，用單因素變量法優(yōu)化相關實驗條件；建立重氮偶合衍生化結合μSI-LOV光纖傳感分析血漿中異丙酚并應用于異丙酚模擬生物

3、樣品分析以及活體大鼠血漿中異丙酚分析。
　　結果：1.異丙酚衍生化及分析：異丙酚重氮偶合衍生化后生成橙紅色偶合產物，最大吸收波長（λmax）在483nm處，反應條件確定為：用0.06mol/L鹽酸溶解對氨基苯磺酸并與亞硝酸鈉反應5min生成濃度為5.780×10-4mol/L4-磺酸基氯化重氮苯再與異丙酚混合，加入濃度為0.7mo l/L的氫氧化鈉溶液，常溫反應10 min為最佳。偶合產物在20 min內穩(wěn)定；DNS-Cl對異丙酚

4、熒光衍生化后產物激發(fā)和發(fā)射波長（λex、λem）分別位于345、500nm，衍生化條件確定為：乙腈作為DNS-Cl、異丙酚的溶劑，DNS-Cl與異丙酚摩爾比為8:1，加入0.1mo l/mL氫氧化鈉溶液，溫度為60℃避光反應5 min，產物需萃取，以環(huán)己烷為萃取溶劑萃取1 min結果最佳，產物在10 min內基本保持穩(wěn)定；重氮偶合衍生化-紫外可見分光光度法分析血漿中異丙酚濃度范圍在6~21μg/mL呈良好線性關系（r=0.9960），在

5、高、中、低3個水平濃度平均方法回收率在102.9％~104.5%之間，精密度（RS D）4.1%~5.5%，方法重復性符合要求，并考察異丙酚前處理后在4小時內保持穩(wěn)定。2.重氮偶合衍生結合μSI-LOV光纖傳感分析異丙酚最優(yōu)條件為：以50μL/s的流速順序吸入50μL約1.156×10-3mol/L4-磺酸基氯化重氮苯溶液，50μL異丙酚溶液，40μL0.2mol/LNaOH溶液到儲液管中無需停流，再反向以15μL/s流速打入流通池檢測

6、；重氮偶合衍生化結合μSI-LO V光纖傳感分析血漿中異丙酚濃度范圍在3~18μg/mL呈良好線性關系（r=0.9990），高、中、低3個濃度的平均方法回收率在89.8%~99.6%之間，精密度4.3%~5.4%，方法重復性符合要求，并考察異丙酚前處理后在4小時內保持穩(wěn)定；該法可測得給藥后10min內活體大鼠血漿中異丙酚含量，通過方法學驗證測定血漿中異丙酚濃度范圍在3~24μg/mL呈良好線性關系（r=0.9960），高、中、低3個濃度

7、的平均方法回收率在92.7%~105.5%之間，精密度（RSD）5.3%~7.5%。
　　結論：
　　1.異丙酚重氮偶合衍生化后吸收波長紅移、吸光度值增加，反應條件容易控制，反應速度快；DNS-Cl對異丙酚衍生化后λex、λem紅移，熒光強度低，沒用于血漿中異丙酚分析，提供考察結果為后續(xù)研究提供參考；重氮偶合衍生-紫外可見分光光度法可用于分析血漿中異丙酚，避免血中內源性物質干擾，方法簡便、快捷。
　　2.異丙酚重氮偶合