灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)對苯噻菌酯和咯菌腈的抗藥性風險研究.pdf

1、由灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）引起的灰霉病是一種世界性病害，在蔬菜、果樹、花卉等200多種植物中均能發(fā)生。該病的防控主要以化學防治為主。但由于灰葡萄孢菌是一種高抗藥性風險的病原菌，對生產(chǎn)中常用的殺菌劑如多菌靈、乙霉威、嘧霉胺、腐霉利和啶酰菌胺等已經(jīng)產(chǎn)生了抗藥性，造成嚴重的經(jīng)濟損失。
　　苯噻菌酯（benzothiostrobin）是由華中師范大學創(chuàng)制的一種新型甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑(QoIs)，具有高效、廣譜的抗

2、菌活性，已經(jīng)進入我國的農(nóng)藥登記程序。本文通過研究灰葡萄孢菌對苯噻菌酯的生物學特性、建立敏感性基線，評估其抗性發(fā)生的風險，并初步探討其抗性機制，為灰霉病的可持續(xù)防控提供理論基礎(chǔ)。研究結(jié)果表明:1.苯噻菌酯對灰葡萄孢菌的菌絲生長和孢子萌發(fā)具有強烈的抑制作用，且抑菌活性高于同類殺菌劑嘧菌酯;2.苯噻菌酯具有較好的跨層運輸能力，但向上和向下的輸導活性差，對灰霉病具有很好的保護作用，25μg/mL時防效高達95％以上;3.采用菌絲生長速率法建立了

3、灰葡萄孢菌對苯噻菌酯的敏感性基線，EC50值變化范圍是0.0033～0.3921μg/mL，平均EC50值為0.0859±0.0788μg/mL，敏感性頻率分布呈單峰曲線;4.苯噻菌酯與其它QoIs如嘧菌酯、醚菌酯和吡唑醚菌酯存在正交互抗性，但與不同作用機制的殺菌劑無交互抗性;5.苯噻菌酯抗性菌株的生物適合度（菌絲生長、產(chǎn)孢能力和致病力）與敏感菌株相比無顯著性差異;6.抗性菌株的細胞色素b(Cyt b)143位發(fā)生點突變，基因型為G14

4、3A。綜上所述，評估灰葡萄孢菌對苯噻菌酯存在較高的抗藥性風險，建議苯噻菌酯與其它作用機制的殺菌劑混合使用來有效控制灰霉病，以降低抗藥性發(fā)生的風險。
　　由瑞士先正達公司開發(fā)的咯菌腈(fludioxonil)是目前防治灰霉病的有效藥劑之一，2012年在我國獲得登記。但國外已有灰葡萄孢菌對咯菌腈低水平抗性的報道。本文于2012-2014年檢測了江蘇和山東部分地區(qū)灰葡萄孢菌對咯菌腈的抗藥性情況，并從生理生化和分子水平上研究了田間、室內(nèi)抗

5、藥性突變體的特性，對咯菌腈的科學使用和抗性機理研究具有重要意義。結(jié)果表明:1.江蘇地區(qū)未發(fā)現(xiàn)抗性菌株，但是從2013年分離自山東壽光的黃瓜灰葡萄孢菌和2014年分離自山東濰坊的番茄灰葡萄孢菌株中，發(fā)現(xiàn)了抗性菌株，低抗頻率分別為10.67％和17.21％，高抗頻率分別為2.67％和1.30％，這是在國際上首次發(fā)現(xiàn)田間高抗咯菌腈菌株;2.藥劑離體馴化獲得了6株咯菌腈抗性突變體，抗性穩(wěn)定，抗性倍數(shù)30～＞10000;3.與敏感菌株相比，田間高

6、抗菌株和藥劑馴化抗性突變體的生物適合度（菌絲生長速率、產(chǎn)孢能力、致病力）均顯著下降，并且對滲透脅迫（如0.8M葡萄糖、0.5M山梨醇、0.5 M NaCl、0.5M KCl、0.2 M CaCl2和0.3 M MgCl2）高度敏感;4.用1μg/mL咯菌腈處理4h后，敏感菌株菌絲體內(nèi)甘油含量及Bchog1表達量顯著上升，上升幅度顯著高于田間、室內(nèi)咯菌腈抗性突變體;5.田間、室內(nèi)高抗突變體的Bos1基因均發(fā)生突變，但二者有顯著差異:田間高

7、抗菌株的突變位點均位于該基因近N末端的HAMPs結(jié)構(gòu)域，而藥劑馴化高抗突變體的突變類型分為兩種，位于HAMPs結(jié)構(gòu)域，或者位于近C末端的HATPase_c結(jié)構(gòu)域。因此推測:灰葡萄孢菌對咯菌腈高水平抗藥性的產(chǎn)生是由菌體Ⅲ型雙組份組氨酸激酶Bos1的突變引起的，該突變降低了菌體在藥劑脅迫下HOG-MAPK途徑的激活水平，使菌體內(nèi)部甘油含量保持相對穩(wěn)定，進而使其在藥劑作用下存活下來。田間咯菌腈抗性群體的形成應(yīng)引起人們密切關(guān)注，需改變該藥劑的使

8、用技術(shù)，降低藥劑的選擇壓力，采用與其它殺菌劑輪換或混配使用技術(shù)，延緩抗藥性的形成、發(fā)展和流行。
　　頻繁使用單作用位點的現(xiàn)代殺菌劑容易產(chǎn)生抗藥性，為了延長現(xiàn)有防治灰霉病藥劑的使用壽命，本文通過復配技術(shù)，旨在篩選出有效成分相容性好、生物活性高、增效作用顯著的殺菌劑配方，這對灰霉病的防治及抗藥性治理具有重要的現(xiàn)實意義。結(jié)果表明:1.苯噻菌酯與A、苯噻菌酯與B分別以1∶1、1∶4混配時增效作用最顯著，SR值分別為3.2和2.5;2.這2