馬鈴薯α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌的體外抑菌活性研究.pdf

1、本試驗(yàn)用0.5％的硫酸浸提和28％的氨水沉淀的方法從馬鈴薯皮中提取糖苷生物堿(TGA)，并采用柱層析和薄層層析的方法純化分離出α-茄堿(α-solanine)，以α-茄堿為試驗(yàn)材料，灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)為供試菌種，采用平板涂布法測(cè)定α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MFC)，菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定抑制率和半數(shù)效應(yīng)濃度(EC50)。并通過牛津杯法研究了α-茄堿體外抑制灰葡萄孢菌的影響因素（p

2、H值、熱處理、金屬鹽），在此基礎(chǔ)上對(duì)α-茄堿的抑菌機(jī)制和機(jī)理進(jìn)行初步研究。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)試驗(yàn)采用0.5％的硫酸浸提和28％的氨水沉淀的方法從馬鈴薯皮中提取糖苷生物堿，得粗樣質(zhì)量為1.38mg/g。通過薄層層析法(展開劑為氯仿-甲醇-2％氨水(70∶30∶5，v/v)，顯色劑為5％的硫酸乙醇液）鑒定，以硅膠為吸附劑，乙酸乙酯-95％乙醇-10％氨水(80∶30∶4，v/v)洗脫部位得到α-茄堿單體，α-茄堿的Rf值為

3、0.38（與標(biāo)準(zhǔn)品一致）。洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得α-茄堿。
　　(2)采用平板涂布法測(cè)定α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌的MIC是12.5μmol/L，MFC是18.75μmol/L。通過菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌的抑制率及EC50值，得出:α-茄堿濃度為18.75時(shí)，其對(duì)灰葡萄孢菌的抑制率達(dá)到93.24％，α-茄堿的EC50值為7.241μmol/L。
　　(3)采用牛津杯法測(cè)定不同濃度的α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌的體外抑制效果，結(jié)果

4、表明:當(dāng)α-茄堿的濃度為50μmol/L時(shí)，其對(duì)灰葡萄孢菌表現(xiàn)出高度敏感性，且隨著α-茄堿濃度的增加，敏感度增加。故本試驗(yàn)選取50μmol/L為α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌的最適抑菌濃度。在最適濃度下研究α-茄堿的抑菌活性受到pH、熱處理溫度和時(shí)間、金屬鹽的影響。當(dāng)α-茄堿溶液的pH值為7時(shí)，對(duì)灰葡萄孢菌的抑制效果最好;對(duì)α-茄堿進(jìn)行熱處理會(huì)影響其對(duì)灰葡萄孢菌的抑制效果，當(dāng)加熱溫度不超過80℃時(shí)，其抑菌效果具有良好的穩(wěn)定性，尤其當(dāng)溫度不超過60

5、℃時(shí)，隨著加熱時(shí)間的延長(zhǎng)，其抑菌圈直徑變化小于1 mm;當(dāng)加熱溫度升至80℃，其抑菌圈直徑隨溫度增加和時(shí)間延長(zhǎng)而縮小;濃度為0.25％、0.5％、1％、2％和3％的NaCl、MgSO4、CaCl2和KCl均能加強(qiáng)α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌的抑制效果，且在此濃度范圍內(nèi)隨金屬鹽濃度增大，α-茄堿的抑菌直徑增大，效果增強(qiáng)。
　　(4)由α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌作用后的轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論:α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌的作用方式與它的濃度和作用時(shí)間有關(guān)，6.2

6、5μmol/L和12.5μmol/L的α-茄堿與灰葡萄孢菌接觸3d，對(duì)其起僅抑制作用;6.25μmol/L和12.5μmol/L的α-茄堿與灰葡萄孢菌接觸6d、12d和18.75μmol/L的α-茄堿與灰葡萄孢菌接觸3d、6d、12d，對(duì)其均有殺滅作用。通過對(duì)不同濃度的α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌孢子抑制的速率和持續(xù)時(shí)間的測(cè)定得出結(jié)論:18.75μmol/L和25μmol/L的α-茄堿對(duì)灰葡萄孢菌孢子的殺滅時(shí)間分別為10h和8h。在含有不同濃度