人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3胞外1-3區(qū)基因的表達(dá).pdf

1、目的：1.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3基因的原核表達(dá)載體構(gòu)建；2.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3基因的原核融合表達(dá)。 方法：以本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的克隆質(zhì)粒為模板，設(shè)計(jì)合適引物，在上游引物中加入酶切位點(diǎn)和起始密碼，在下游引物中加入終止密碼和酶切位點(diǎn)，把上述VEGFR3擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)切膠回收純化后與pBV220質(zhì)粒經(jīng)雙酶切純化后的產(chǎn)物連接，把該質(zhì)粒命名為pBV220-VEGFR3,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，篩選出陽(yáng)性菌株，溫控誘導(dǎo)表達(dá)，超聲破菌，對(duì)包涵體

2、進(jìn)行洗滌純化.以pBV220-VEGFR3為模板通過(guò)PCR方法構(gòu)建C端含有HisTag的pBV220-VEGFR3his質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，用Western-blotting鑒定，用Ni2+-NTA樹(shù)脂柱對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化。 結(jié)果：構(gòu)建了pBV220-VEGFR3質(zhì)粒表達(dá)載體，SDS-PAGE電泳表明在大腸桿菌DH5α中成功表達(dá)出VEGFR3因子，同時(shí)構(gòu)建了pBV220-VEGFR3融合表達(dá)載體，SDS-PAGE電泳和