青枯勞爾氏菌拮抗菌SQR-T3的誘變選育及其突變株的生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、由茄科勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的番茄青枯病，極大程度上威脅著我國(guó)番茄等作物的生產(chǎn)。由于傳統(tǒng)的化學(xué)防治方法有著效果不明顯、易產(chǎn)生抗性或污染環(huán)境等諸多問(wèn)題，生物防治作為一種環(huán)保、安全、可持續(xù)的新興學(xué)科應(yīng)運(yùn)而生。然而，為獲得拮抗性能更強(qiáng)、生物學(xué)性狀更有利于生產(chǎn)利用的優(yōu)良菌株，我們還需要對(duì)野生的拮抗菌株進(jìn)行優(yōu)良性狀的選育。本試驗(yàn)以拮抗菌SQR-T3為出發(fā)菌株進(jìn)行紫外(UV)和亞硝酸鈉(NaNO2)的復(fù)合誘變篩

2、選獲得兩株正突變株T-32和T-39，并對(duì)兩株突變株進(jìn)行了一系列研究，結(jié)果分述如下:
　　(1)研究了UV和NaNO2兩種誘變劑對(duì)拮抗菌SQR-T3的致死率，確定了合適的誘變劑量:a.波長(zhǎng)260nm，功率15W，輻射垂直距離30cm的紫外照射180s;b.終濃度為0.1 mol/L的NaNO2溶液，處理12min。
　　(2)經(jīng)過(guò)多次復(fù)合誘變及篩選后獲得五株生長(zhǎng)速度和抑菌效果均有提高的正突變株:T-4、T-11、T-32、T

3、-39和T-43。它們的抑菌圈相比出發(fā)菌株分別增大了24.1％、14.8％、22.2％、24.1％和20.4％，相同培養(yǎng)時(shí)間(16h)和條件下OD600增長(zhǎng)分別為3.43％、9.38％、8.66％、11.89％和10.30％。穩(wěn)定性試驗(yàn)中，T-4、T-11和T-43均在傳代過(guò)程中先后失去了抑菌活性上的優(yōu)勢(shì)，而T-32和T-39的抗菌能力很穩(wěn)定。
　　(3)菌株T-32和T-39的生理生化特性、抗生素敏感性和野生菌株相同。
　

4、　(4)研究了兩株突變株及出發(fā)菌株在番茄根際的定殖作用，結(jié)果表明，三株菌均能在番茄根際良好定殖，且突變株T-39的定殖能力有所提高，定殖密度為出發(fā)菌株SQR-T3的1.32倍，在移栽30天后達(dá)1.559×106。
　　(5)通過(guò)盆栽實(shí)驗(yàn)研究了兩株突變菌株與出發(fā)菌株對(duì)番茄植株的促生作用，結(jié)果顯示，三株菌均能有效促進(jìn)番茄植株的生長(zhǎng)及產(chǎn)量的提高，尤其與有機(jī)肥結(jié)合使用，效果更佳，接種SQR-T3、T-32和T-39的處理分別比CK增產(chǎn)31

5、.14％、34.52％和49.74％，與有機(jī)肥混合接種SQR-T3、T-32和T-39的處理分別較OF1增產(chǎn)29.97％、44.58％和50.51％。拮抗菌和有機(jī)肥對(duì)番茄根系的生長(zhǎng)發(fā)育也有較強(qiáng)的促進(jìn)作用。突變株T-39促進(jìn)番茄植株和根系生長(zhǎng)發(fā)育的作用較出發(fā)菌株有所提高。
　　(6)通過(guò)盆栽實(shí)驗(yàn)研究了兩株突變菌株與出發(fā)菌株對(duì)番茄青枯病的防控作用，結(jié)果顯示，施用有機(jī)肥可有效降低番茄青枯病的發(fā)病率，病情指數(shù)降低0.89，防病率24.7％

6、;三株拮抗菌與化肥結(jié)合使用時(shí)與CK相比病情指數(shù)分別降低了1.00、1.06和1.19，防病率分別為27.7％、29.4％和33％;與有機(jī)肥結(jié)合使用的防治效果分別達(dá)到了62.6％、65.4％和70.0％，且突變株T-39與出發(fā)菌株相比差異較顯著。
　　(7)對(duì)拮抗菌SQR-T3、T-32和T-39對(duì)番茄青枯病的防治機(jī)理進(jìn)行了初步研究，得到以下結(jié)論:三株拮抗菌具有分泌纖維素酶、β-1，3-葡聚糖酶和蛋白酶的功能，而且突變株T-39在產(chǎn)

7、蛋白酶的能力上與CK相比有明顯提高;三株拮抗菌均可檢測(cè)到Iturin、Bacillomycin、Subtilisin QK、Fengycin和Sufactin等多種拮抗物質(zhì)的合成基因;脂肽類物質(zhì)提取和蛋白質(zhì)分級(jí)沉淀獲得的粗提物活性檢測(cè)均有抑菌圈，表明三株拮抗菌能夠產(chǎn)脂肽類活性拮抗物質(zhì)，且T-39號(hào)突變株抑菌圈相對(duì)較大。
　　(8)比較了三株拮抗菌的生長(zhǎng)條件:三株拮抗菌均在培養(yǎng)溫度為30℃-37℃，裝液量50 mL/250 mL，初