11種生物胺的測定及藥物干預(yù)對抑郁大鼠生物胺的影響.pdf

1、目的：
　　建立定量測定大鼠腦組織中11種生物胺及其前體氨基酸和代謝物的HPLC-ECD法；對比同批大鼠皮層和海馬中11種待測物的含量；建立慢性不可預(yù)見性溫和刺激（Chronic Unpredictable Mild Stress，CUMS）致抑郁大鼠模型并研究AA-COX2/5-LO通路干預(yù)對抑郁大鼠皮層中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響。
　　方法：
　　1.采用日本SHIMADZU高效液相色譜儀和ED723電化學(xué)檢測器，色

2、譜柱為依利特ODS2分析柱（4.6 mm?250 mm，5?m），流動相為乙腈：緩沖液（25 mmol/L醋酸鈉，25 mmol/L檸檬酸，0.01 mmol/L EDTA-2Na，1.0 mmol/L1-辛烷磺酸鈉，醋酸調(diào)pH=3.35）=10:90（v/v)，柱溫為30℃，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為20?L，電化學(xué)檢測器工作電壓為700 mV，量程為10?A。
　　2.對比同批大鼠皮層和海馬中11種生物胺及其前體氨基

3、酸和代謝物的含量：雄性SD大鼠8只，測定海馬和皮層中的Tyr、Trp、DA、NE、E、5-HT、3-MT、DOPAC、MHPG、HVA、5-HIAA含量，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）的形式進(jìn)行統(tǒng)計描述。
　　3.建立抑郁大鼠模型并干預(yù)AA-COX2/5-LO通路：雄性SD大鼠90只，隨機(jī)選取10只作為正常組，大籠飼養(yǎng)，每籠5只，不加任何刺激。余下80只SD大鼠孤養(yǎng)并給予6周CUMS，于造模42天后進(jìn)行行為學(xué)測試，選取抑郁相關(guān)行

4、為學(xué)指標(biāo)有顯著差異的大鼠70只，隨機(jī)分為模型組、舍曲林5 mg/kg、美洛昔康3 mg/kg、美洛昔康1 mg/kg、咖啡酸30 mg/kg、咖啡酸10 mg/kg、美洛昔康1 mg/kg+咖啡酸10 mg/kg，給予藥物灌胃21天，模型組和正常組給予等體積0.5％CMC-Na。
　　4.干預(yù)AA-COX2/5-LO通路的抗炎治療對抑郁大鼠皮層中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響：于給藥第22天進(jìn)行行為學(xué)測試，每組選取SD大鼠5只，測定皮層中

5、Tyr、Trp、DA、NE、E、5-HT、3-MT、DOPAC、MHPG、HVA、5-HIAA含量，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）的形式進(jìn)行統(tǒng)計描述。
　　結(jié)果：
　　11種目標(biāo)分析物的標(biāo)準(zhǔn)曲線的r2≥0.9984，檢出限在0.04-1.6 ng之間，定量限在0.12-5 ng之間。日內(nèi)精密度分別小于8.83%，日間精密度分別小于9.17%，相對回收率為94.12%-108.07%，提取回收率為73.54%-99.90%。

6、
　　對比同批8只大鼠的海馬和皮層中的生物胺及其前體氨基酸和代謝物，E和3-MT在皮層和海馬中濃度均低于定量限，DA和HVA在海馬中的濃度低于定量限，5-HT在皮層中的濃度低于定量限。Tyr在海馬中的濃度明顯高于皮層，DOPAC在皮層中的濃度明顯高于在海馬中的濃度。MHPG，NE，5-HIAA和Trp的濃度在海馬和皮層中差異不大。
　　對比模型組、舍曲林5 mg/kg、美洛昔康3 mg/kg、美洛昔康1 mg/kg、咖啡酸3

7、0 mg/kg、咖啡酸10 mg/kg、美洛昔康1 mg/kg+咖啡酸10 mg/kg組皮層中神經(jīng)遞質(zhì)的含量，并采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，模型組NE濃度明顯下降（P<0.05），說明大鼠抑郁模型建立成功；美洛昔康3 mg/kg和咖啡酸30 mg/kg組NE濃度有升高的趨勢；美洛昔康3 mg/kg相比于美洛昔康1 mg/kg組，咖啡酸30 mg/kg相比于咖啡酸10 mg/kg組，NE濃度明顯偏高

8、（P<0.05）提示美洛昔康或咖啡酸大劑量或?qū)σ钟舭Y有療效；美洛昔康1 mg/kg+咖啡酸10 mg/kg聯(lián)合治療后HVA、DOPAC、Tyr明顯高于美洛昔康小劑量和咖啡酸小劑量組（P<0.05），說明聯(lián)合治療并不優(yōu)于單一給予COX2抑制劑美洛昔康或5-LO抑制劑咖啡酸。
　　結(jié)論：
　　建立的HPLC-ECD法分析快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好，適用于定量測定大鼠腦組織中11種生物胺及其前體氨基酸和代謝物。
　　對比同批大