蓮心生物堿的熒光法含量測定及甲基蓮心堿對胺碘酮藥代動力學的影響.pdf

1、第一部分RP-HPLC-FL同時測定蓮子心中三種雙芐基異喹啉類生物堿的含量
　　 本文建立了一種新的RP-HPLC-FL法同時測定蓮子心中三種雙芐基異喹啉類生物堿含量的方法，并將該方法和RP-HPLC-UV 做比較。以Hypersil-C18 （250 mm×4.6mm,5μm）為固定相，甲醇-乙腈-水-三乙胺（20：40：40：0.12，v/v/v/v）為流動相，紫外檢測波長和熒光檢測波長分別從紫外掃描和熒光掃描獲得，流速為1

2、.0 mL·min-1。結果發(fā)現(xiàn)三種生物堿的熒光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜圖各自之間相似，熒光最佳波長為λex=280 nm和λem=620 nm。HPLC-UV和HPLC-FL 測定三種生物堿，其線性分別在1~50 μg/mL和10~100 μg/mL 范圍內良好，日內和日間RSD 值在1.0~8.0％，3種生物堿的加樣回收率在95~105％。紫外檢測的最低檢測限和最低定量限分別為250~500ng/mL和500~1000 ng/mL，熒光檢

3、測的最低檢測限和最低定量限分別為500~1000ng/mL和1000~2500 ng/mL。利用兩種檢測器測定了不同批次提取的蓮心總堿中3中生物堿的含量，結果顯示兩種方法測得的含量相近。這表明：蓮子心中3 種雙芐基異喹啉類生物堿的RP-HPLC-FL 檢測方法簡單、可靠、結果準確，是一種新的樣品含量測定方法。
　　 第二部分甲基蓮心堿對胺碘酮在大鼠體內藥動學的影響研究
　　 1．胺碘酮的小樣本量血樣藥物濃度測定方法的優(yōu)化

4、關于胺碘酮（amiodarone）在生物樣本中濃度的測定方法，文獻已有報道。這些方法存在針對大樣本量的生物樣品或固相萃取等耗費比較大等缺點。本部分采用耗費比較小的沉淀蛋白和液-液萃取結合的方法來處理小樣本量生物樣本，優(yōu)化了amiodarone的測定方法。本方法采用Agilent 1100 系列高效液相色譜儀 (G1310A 平流泵，20 μL 定量環(huán)手動進樣器，G1314A 可變波長紫外檢測器，LGC-1025M 柱溫箱，Sepu300

5、0p 色譜工作站)，以Hypersil ODS-C18 (4 mm×10 mm，粒徑10 μm)為固定相，以甲醇-水-乙腈-冰醋酸 (200/36/23.6/0.86，v/v/v/v; pH 7.53)為流動相，采用乙腈沉淀和二氯甲烷萃取相結合的方法對樣品進行預處理。在本實驗條件下，amiodarone和內標它莫昔芬（tamoxifen）均有較好的色譜峰和較好的分離度（R> 2），tamoxifen和amiodarone的保留時間分別約

6、為8 min和20 min；6個不同來源的SD 大鼠空白血漿中的雜質都不干擾樣品峰，特異性較高；采用加權二乘法計算的標準曲線線性良好，偏差較小，r ≥ 0.99；低、中、高三種濃度的amiodarone的絕對回收率在80-95％范圍內，內標的回收率在78-82％范圍內；日內和日間精密度分別小于9.4％和10.1％；
　　 amiodarone的相對回收率在96-103％范圍內；amiodarone 標準品放在4 oC 放置一個月

7、、經過萃取的血漿樣品殘渣在室溫避強光放置12 h、血漿樣品在-60 oC的冰箱內放置1個月和經歷三次冰融循環(huán)均穩(wěn)定。
　　 2．甲基蓮心堿對胺碘酮在大鼠體內藥代動力學的影響胺碘酮（amiodarone）又稱乙胺碘呋酮，是一種常用的III 類抗心律失常藥，臨床上用來治療室上性和室性心律失常。Neferine是從中藥蓮子心中提取出來的一種抗心律失常的有效成分，我們課題組擬研究amiodarone和neferine的聯(lián)合用藥。本實驗的

8、目的是考察neferine 對amiodarone的藥代動力學影響。本實驗采用SD 大鼠，隨機分成兩組，第一組用于研究neferine 對口服amiodarone 藥代動力學的影響；第二組用于研究neferine 對靜脈amiodarone 藥代動力學的影響。實驗中neferine 均采用灌胃給藥。
　　 在預先設定的時間點從大鼠的眼眶靜脈叢處取得血樣并立即離心取出血漿，冰凍在-60oC的冰箱內保存，直到樣品分析。獲得amiod