甲基蓮心堿逆轉(zhuǎn)K562-G01細(xì)胞MDR機制的探討.pdf

1、目的：研究甲基蓮心堿(NeD逆轉(zhuǎn)K562/G01細(xì)胞株對伊馬替尼(STl571)的耐藥性，探討Nef逆轉(zhuǎn)K562/G01細(xì)胞MDR的機制。 方法：采用改良四唑鹽法(MTT)檢測細(xì)胞毒性；高效液相色譜(HPLC)法測定Nef對K562/G01細(xì)胞內(nèi)STl571的積聚濃度的影響；蛋白質(zhì)免疫印跡(Westem-Bloting)法檢測Nef對K562/G01細(xì)胞P-gp的表達(dá)影響；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測Nef對K562

2、/G01細(xì)胞mdr-1基因表達(dá)的影響。 結(jié)果：(1)①Nef 16、32、64μmaol·L-1對K562/G01細(xì)胞及K562細(xì)胞均有抑制細(xì)胞增殖的作用，隨著劑量的增加，作用也增加。②STl571對K562細(xì)胞的IC50為0.55±0.12μmol·L-1，對K562/G01細(xì)胞的IC50為24.33±1.93μmol·L-1，K562/G01細(xì)胞對STl571耐藥的是K562細(xì)胞的43.99倍；Nef(4lamol·L-1)

3、、Nef(8μmol·L-1)、維拉帕米(VRP)(10gmol·L-1)分別聯(lián)合STI 571處理K562/G01細(xì)胞后，均不同程度的降低了STl571對K562/G01的IC50，由原來的24.33±1.931maol·L-1分別降至13.42±0.73μmaol·L-1、10.15±1.27μmaol·L-1、9.70±0.411amol·L-1，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為1.81、2.35、2.50，相對逆轉(zhuǎn)率分別為45.9％、60.0％、

4、61.5％，Nef隨著劑量的增加，逆轉(zhuǎn)作用也增強(P<0.05)；NefSgmol·L-1組逆轉(zhuǎn)作用與VRP10μmol·L-1組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。(2)①吸收1h和3h后，K562細(xì)胞內(nèi)STl571含量(分別為1.8069±0.1890μmol·L-1和2.349±0.0736μmol·L-1)均高于K562/G01細(xì)胞內(nèi)STI571含量(分別為0.1991±0.0193μmaol·L-1和0.1987±0.0196μmo

5、l·L-1)(P<0.01)。②吸收1h和3h后，分別經(jīng)Nef,VRP處理組的K562/G01細(xì)胞STl571含量均較未經(jīng)藥物處理組的K562/G01細(xì)胞內(nèi)STl571含量高(P<0.01)。⑧吸收1h后，Nef處理組的K562/G01細(xì)胞內(nèi)STI571含量低于VRP處理組的K562/G01細(xì)胞內(nèi)STI571含量(P<0.01)；吸收3h后，Nef處理組的K562/G01細(xì)胞內(nèi)STI571含量略高于VRP處理組的K562/G01細(xì)胞內(nèi)S

6、TI571含量，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。(3)①K562/G01細(xì)胞P-gp表達(dá)(0.5956±0.0185)較K562細(xì)胞P-gp表達(dá)(0.0285±0.0098)增高(P<0.01)；分別經(jīng)Nef(8gmol·L-1)、VRP(10μmol·L-1)處理48h和96h后K562/G01細(xì)胞P-gp表達(dá)均較未經(jīng)藥物處理組K562/G01細(xì)胞P-gP表達(dá)減低(P<0.01)；且96h組均低于48h組(P<0.01)；Nef(8μ

7、maol·L-1)處理48h或96h K562/G01細(xì)胞P-gP表達(dá)分別較VRP(10μmol·L-1)48h或96h K562/G01細(xì)P-gP表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。②K562/G01細(xì)胞mdrl基因表達(dá)(0.9783±0.0873)較K562細(xì)胞mdr-1基因表達(dá)(0.0191±0.0239)增高(P<0.01)；分別經(jīng)Nef(8μmol·L-1)、VRP(10μmol·L-1)處理48h和96h后，K562/G01細(xì)

8、胞mdr-1基因表達(dá)均較未經(jīng)藥物處理組K562/G01細(xì)胞mdr-1基因表達(dá)減低(P<0.01)；96h組均低于48h組(P<0.01)；Nef(8μmol·L-1)處理48h或96h K562/G01細(xì)胞mdr-1基因表達(dá)分別較VRP(10μmol·L-1)48h或96hK562/G01細(xì)胞mdrl基因表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。 結(jié)論：(1)Nef對K562/G01細(xì)胞及K562細(xì)胞均有抑制細(xì)胞增殖的作用，且與劑量有關(guān)