腦缺血預(yù)處理對炎癥相關(guān)因子表達的研究.pdf

1、隨著人口老齡化的趨勢加快，腦血管病已經(jīng)成為我國第一位致殘和死亡原因，對該病的研究一直是科研和臨床研究的熱點。腦缺血預(yù)處理(cerebral ischemic preconditioning，CIP)是指對腦組織采用缺血處理，如一次或多次短暫性、非致死性腦缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）刺激，啟動腦組織產(chǎn)生內(nèi)源性保護機制，將對致死性的缺血產(chǎn)生顯著的耐受，從而減弱或阻止腦缺血缺氧引起的瀑布反應(yīng)。炎性反應(yīng)在缺血再

2、灌注損傷的機制中占重要地位，包括一系列炎癥細胞和炎癥因子的參與，還涉及到固有免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的激活，起到了免疫調(diào)節(jié)和趨化作用，因此減輕炎癥反應(yīng)是治療缺血性腦血管病的重要環(huán)節(jié)。炎癥過程中，高遷移率族蛋白B1（high mobility group protein，HMGB1）主動分泌至胞外，與晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(receptor for advanced glycation end-products，RAGE)和Toll樣受體

3、4(Toll-like receptor4，TLR4)結(jié)合，最終激活核因子κB(Nuclear factor-kappa B，NF-κB)，從而介導(dǎo)炎性反應(yīng)。本研究通過建立大鼠局灶性CIP模型，深入研究RAGE和TLR4在CIP的生物學(xué)作用及可能機制，為再灌注損傷的臨床防治提供新的靶點。
　　將198只Sprague Dawley成年雄性健康大鼠隨機分為假手術(shù)組(Sham，n=66)、缺血預(yù)處理組（CIP，n=66）和缺血再灌注組

4、(I/R，n=66)，采用改良的Zea-Longa方法制備大鼠大腦中動脈栓塞(MCAO)模型，缺血再灌注組給予缺血2小時后恢復(fù)血流，缺血預(yù)處理組采用二次線栓法，缺血10分鐘為預(yù)處理措施，72小時后給予缺血2小時再恢復(fù)腦部血流，假手術(shù)組僅分離頸總動脈，不給于栓塞處理。隨機分為再灌注后0.5d，1d，2d，3d，7d共5個時間點，于再灌注1d時每組隨機選取6只采用TTC染色法用于測定腦梗死體積，各個時間點采用Zea Longa評分標準進行神

5、經(jīng)功能評分，通過免疫組織化學(xué)染色法測定RAGE和TLR4蛋白水平的表達變化，定量即時聚合酶鏈鎖反應(yīng)(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)法測定RAGE和TLR4mRNA表達。
　　本研究發(fā)現(xiàn)，Sham組無梗死灶，CIP組在1d時腦梗死體積為明顯低于I/R組(P＜0.05);Sham組無神經(jīng)功能缺損，CIP組大鼠在0.5d、1d、2d、3d、7d的神經(jīng)功能

6、行為缺陷評分與I/R組大鼠比較明顯減低，有顯著性差異(P＜0.05);與sham組相比，CIP組與IR組缺血半暗帶區(qū)RAGE陽性細胞數(shù)顯著升高(P＜0.05)，CIP組較I/R組的表達明顯降低(P＜0.05)，TLR4陽性細胞數(shù)也在缺血半暗帶區(qū)明顯升高，CIP組與IR組均顯著高于sham組，CIP組低于I/R組，差異顯著(P＜0.05)。CIP組和I/R組RAGE、TLR4mRNA表達均顯著高于sham組(P＜0.05)，均于1d時達高