遠(yuǎn)隔部位缺血預(yù)處理和遠(yuǎn)隔部位缺血后處理對蛋白分子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:缺血性心臟病極大危害人類的健康,盡早的恢復(fù)缺血心肌的血液供應(yīng)是治療成功的關(guān)鍵。但早期再灌注治療,如溶栓、PPCI的應(yīng)用受到堵塞血管再通時間的限制,而且存在缺血再灌注損傷現(xiàn)象,因此盡可能保存缺血心肌,減少再灌注治療過程中心肌損傷是優(yōu)化治療拓展的方向。隨著研究的深入,人們認(rèn)識到加強(qiáng)再灌注期間的心肌細(xì)胞的保護(hù),引發(fā)缺氧缺血心肌細(xì)胞自我保護(hù)機(jī)制的發(fā)生,是行之有效的方法。1986年Murry等首次提出了缺血預(yù)適應(yīng)(ischemic prec

2、onditioning)的概念,2003年,Zhao等發(fā)現(xiàn)了缺血后適應(yīng)(ischemic postconditioning)類似的內(nèi)源性心肌細(xì)胞保護(hù)機(jī)制。隨后人們發(fā)現(xiàn)了不同器官還具有遠(yuǎn)隔缺血預(yù)適應(yīng)與后適應(yīng)(remote ischemic preconditioning and remote ischemic postconditioning)的保護(hù)現(xiàn)象,并開展了相應(yīng)的研究。不論是缺血預(yù)適應(yīng)、缺血后適應(yīng)還是遠(yuǎn)隔器官的缺血預(yù)適應(yīng)與后適應(yīng),這

3、些內(nèi)源性細(xì)胞保護(hù)機(jī)制的產(chǎn)生,都依賴于缺血預(yù)適應(yīng)或缺血后適應(yīng)對細(xì)胞內(nèi)多條信號通路進(jìn)行激活和抑制實(shí)現(xiàn)的。P38 MAPK和ERK(1/2)的磷酸化作用在缺血預(yù)適應(yīng)和缺血后適應(yīng)的保護(hù)作用中被證實(shí),HSP27和BCL-2也是參與了細(xì)胞保護(hù)作用。但遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理和后處理的抵抗缺血再灌注損傷的作用機(jī)制還不清楚,本文觀察以上蛋白分子在遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理和后處理后磷酸化程度/表達(dá)程度是否發(fā)生變化,探討其保護(hù)作用可能的機(jī)制。
　　方法:選擇成年雄性體重

4、相近的長爪沙土鼠36只(體重60-70g),隨機(jī)分為6組,每組6只:A組為假手術(shù)組,暴露雙側(cè)頸動脈,不予結(jié)扎;B組為缺血再灌組,僅給予30min缺血,1h再灌;C組為缺血預(yù)處理組,給予單側(cè)頸總動脈3個循環(huán)的3min夾閉,2min再灌的預(yù)適應(yīng)后進(jìn)行30min缺血、1h再灌;D組為缺血后處理組,分離雙側(cè)頸總動脈后,先行30min缺血,在再灌注前的1min內(nèi),給予單側(cè)頸總動脈10S松開,10S夾閉共三個循環(huán)的缺血后適應(yīng),之后行1h再灌注;E組

5、:缺血預(yù)處理+雙側(cè)缺血再灌組,同時夾閉雙側(cè)頸總動脈,其中右側(cè)行3個循環(huán)的3min夾閉,2min再灌的預(yù)適應(yīng),共計15分鐘,左右側(cè)頸總動脈同時松開,之后行1h再灌注。F組:缺血預(yù)處理+對側(cè)缺血再灌組,在給予3個循環(huán)的3min夾閉,2min再灌的預(yù)適應(yīng)后夾閉預(yù)適應(yīng)對側(cè)頸總動脈,進(jìn)行30min缺血、1h再灌。各組處理后迅速取鼠心臟組織于液氮中研磨,急凍冷藏于-70℃深低溫冰箱,提取心臟標(biāo)本多肽進(jìn)行質(zhì)譜分析,western blot測定沙土鼠心

6、肌內(nèi)P38 MAPK、HSP27、ERK (1/2)磷酸化程度以及BCL-2的表達(dá)程度。
　　結(jié)果:磷酸化p38 MAPK的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為缺血再灌組磷酸化程度明顯增高(P＜0.05),但遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理和后處理組磷酸化程度明顯降低;磷酸化HSP27的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為缺血再灌組磷酸化程度輕微高于假手術(shù)組,不同遠(yuǎn)隔缺血處理組HSP27的磷酸化程度明顯高于缺血再灌組;磷酸化ERK(1/2)結(jié)果為缺血再灌組以及各遠(yuǎn)隔缺血處理組均大幅度高于假手術(shù)組,E

7、RK1各組之間存在差別(P＜0.05),但ERK2各處理組與缺血再灌組之間的差別不大。BCL-2的結(jié)果為缺血再灌組以及各遠(yuǎn)隔缺血處理組相對于假手術(shù)組BCL-2的表達(dá)程度均增高,而經(jīng)過遠(yuǎn)隔缺血處理的動物組,BCL-2表達(dá)上升的幅度高于缺血再灌組。
　　結(jié)論:遠(yuǎn)隔部位的缺血預(yù)處理和遠(yuǎn)隔部位的缺血后處理可以使得靶器官P38MAPK; ERK (1/2); HSP27的磷酸化程度發(fā)生改變,以及BCL-2的表達(dá)增高。遠(yuǎn)隔部位缺血預(yù)處理和遠(yuǎn)隔