遠(yuǎn)隔預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血后血管生成及其相關(guān)因子表達(dá)影響的研究.pdf

1、背景與目的:遠(yuǎn)隔預(yù)處理(Remote ischemic preconditioning，RPC)是繼缺血預(yù)處理(IPC)后發(fā)現(xiàn)的一種在不同器官之間誘導(dǎo)缺血耐受的方法。它通過預(yù)先給予遠(yuǎn)隔部位的器官或組織亞致死性的缺血刺激，來誘導(dǎo)另一器官或組織對(duì)致死性缺血損傷的耐受力。遠(yuǎn)隔預(yù)處理的器官保護(hù)作用自發(fā)現(xiàn)以來，備受神經(jīng)學(xué)界的關(guān)注。目前，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及臨床實(shí)驗(yàn)均已證實(shí)遠(yuǎn)隔預(yù)處理是一種有效且可行的腦保護(hù)誘導(dǎo)方式。但是遠(yuǎn)隔預(yù)處理的分子生物學(xué)機(jī)制仍不明確。

2、血管生成是從先存血管產(chǎn)生新生血管的過程，它受血管生成因了和血管生成抑制因子的精細(xì)調(diào)節(jié)，是機(jī)體一項(xiàng)重要的修復(fù)再生程序，也是腦缺血后神經(jīng)功能修復(fù)的主要途徑之一。本實(shí)驗(yàn)的目的在于研究遠(yuǎn)隔預(yù)處理對(duì)局部腦缺血后缺血半暗帶區(qū)血管生成過程以及相關(guān)因子表達(dá)模式的影響，進(jìn)一步揭示遠(yuǎn)隔預(yù)處理介導(dǎo)腦保護(hù)的分子機(jī)制。
　　方法:雄性SD大鼠（鼠齡11-12周，體重270g-330g），隨機(jī)分為遠(yuǎn)隔預(yù)處理(RPC)組、缺血對(duì)照(ISC)組和假手術(shù)(SH0)

3、組。腦缺血模型采用遠(yuǎn)端大腦中動(dòng)脈閉塞模型。遠(yuǎn)隔預(yù)處理以同側(cè)股動(dòng)脈夾閉15分鐘、復(fù)流15分鐘，循環(huán)三次的方式誘導(dǎo)。采用免疫組化CD31染色法計(jì)數(shù)RPC組、ISC組、SHO組缺血后1天、2天、3天、7天、14天缺血半暗帶區(qū)的微血管密度。免疫熒光CD31/BrdU雙標(biāo)計(jì)數(shù)各小組缺血后2天、7天缺血半暗帶區(qū)新生血管數(shù)目。免疫組化法半定量計(jì)算各實(shí)驗(yàn)小組缺血半暗帶區(qū)膜受體VEGFR-2、Tie-2的表達(dá)水平，WesternBlotting法半定量計(jì)

4、算血管生成因子VEGF-A、Ang-1、Ang-2、HIF-1 alpha的表達(dá)水平。圖片分析采用Image Proplus、Image J軟件，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS19.0軟件，p＜0.05顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:RPC組缺血半暗帶區(qū)微血管密度在缺血后1天、2天、7天、14天均高于ISC對(duì)照組，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，RPC組與ISC組半暗帶區(qū)微血管密度均于缺血后7天達(dá)峰。RPC組半暗帶區(qū)VEGFR-2蛋白表達(dá)水平亦高于

5、ISC組，兩組差異在缺血后1天、2天、3天、7天有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且RPC與ISC組VEGFR-2表達(dá)量也在缺血后7天達(dá)峰，其時(shí)間演變規(guī)律與微血管密度相仿。缺血后半暗帶區(qū)Tie-2的上調(diào)在RPC組更為明顯，兩組蛋白水平差異在缺血后2天、3天、7天、14天有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且RPC組蛋白表達(dá)上調(diào)較ISC組出現(xiàn)更早且持續(xù)時(shí)間更長。在缺血后2天、7天時(shí)RPC組VEGF-A、Ang-2蛋白表達(dá)量均高于ISC組，與之相反，Ang-1的表達(dá)量在缺血2天時(shí)R