凱力康對(duì)腦缺血預(yù)處理大鼠白介素6和腦紅蛋白表達(dá)影響.pdf

1、背景：腦缺血預(yù)處理可誘導(dǎo)腦組織的缺血耐受性從而減輕接下來發(fā)生的致死性缺血對(duì)腦組織的損傷，表現(xiàn)為實(shí)質(zhì)細(xì)胞死亡明顯減少、梗死范圍大幅度縮小、器官功能障礙明顯減輕等。凱力康(注射用尤瑞克林)能選擇性擴(kuò)張缺血部位細(xì)小動(dòng)脈，改善缺血區(qū)血液供應(yīng)，從而對(duì)缺血區(qū)細(xì)胞起到保護(hù)作用。近年來，對(duì)白介素6(Interleukine-6，IL-6)和腦紅蛋白(Neuroglobin，Ngb)在缺血后腦組織及血清中的表達(dá)研究較多，但對(duì)腦缺血預(yù)處理后給予凱力康干預(yù)，

2、對(duì)于IL-6和Ngb的表達(dá)影響研究很少。腦缺血預(yù)處理及凱力康是否通過影響IL-6和Ngb的表達(dá)而對(duì)缺血區(qū)腦細(xì)胞起保護(hù)作用還不十分清楚。 目的：通過研究凱力康對(duì)腦缺血預(yù)處理后腦組織再缺血大鼠神經(jīng)功能缺損、腦梗死體積、腦組織中IL-6和Ngb表達(dá)的影響，探討腦缺血預(yù)處理和凱力康的腦保護(hù)機(jī)制及兩者間的相互作用，從而為其臨床治療缺血性腦血管病提供理論依據(jù)。 方法：72只SD大鼠隨機(jī)化分為3組：腦缺血組(n=24)、腦缺血預(yù)處理組

3、(簡(jiǎn)稱預(yù)處理組，n=24)、預(yù)處理后凱力康干預(yù)組(簡(jiǎn)稱干預(yù)組，n=24)。每組按照再缺血后12h、1d、2d、3d四個(gè)時(shí)間點(diǎn)平均分為4個(gè)亞組(n=6)。缺血組：手術(shù)方法同預(yù)處理組，暴露頸總動(dòng)脈后，不插線進(jìn)行預(yù)處理，消毒后縫合皮膚，24小時(shí)后直接從頸總動(dòng)脈進(jìn)線栓至右側(cè)大腦中動(dòng)脈，造成永久性缺血。術(shù)后半小時(shí)經(jīng)舌下靜脈注射1ml/kg生理鹽水。腦缺血預(yù)處理組：按Koizumi線栓法改良，制成局灶-局灶腦缺血模型。大鼠麻醉后暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸

4、外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，結(jié)扎并離斷頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)端，在頸外動(dòng)脈近心側(cè)殘端剪一小口，經(jīng)此小口插入備好的線栓(直徑0.205mm高彈力碳素魚線，插線頭蘸蠟成圓頭，臨用時(shí)蘸取肝素，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈入顱至大腦前動(dòng)脈，阻滯大腦中動(dòng)脈血流，缺血30分鐘(3次10分鐘，間隔7分鐘)，拔出線栓，結(jié)扎頸外動(dòng)脈殘端，縫合皮膚。術(shù)后半小時(shí)經(jīng)舌下靜脈注射1ml/kg生理鹽水。24小時(shí)后在右側(cè)頸總動(dòng)脈剪一小口，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈再栓至右側(cè)大腦前動(dòng)脈，此線栓不再取出。預(yù)處理后凱力康干預(yù)組

5、：手術(shù)方法同上，但在預(yù)處理術(shù)后半小時(shí)經(jīng)舌下靜脈注射1ml/kg濃度為8.75×10<'-3>PNAU/kg的凱力康。分別觀察三組動(dòng)物的以下指標(biāo)：按Bederson法進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)價(jià)；各組斷頭取腦后以2﹪氯化三苯四唑啉(TTC)染色計(jì)算梗死體積；行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察腦組織病理形態(tài)；免疫組織化學(xué)方法觀察IL-6、Ngb的表達(dá)。 結(jié)果：1．在缺血后相同時(shí)間點(diǎn)，預(yù)處理組比缺血組神經(jīng)功能缺損評(píng)分明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

6、0.05)。干預(yù)組神經(jīng)功能缺損評(píng)分較預(yù)處理組及缺血組均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 2．在缺血后相同時(shí)間點(diǎn)，預(yù)處理組較缺血組梗死體積明顯減小(P<0.01)，干預(yù)組較預(yù)處理組和缺血組腦梗死體積均減小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 3．HE染色光學(xué)顯微鏡下，三組在海馬區(qū)均可見正常神經(jīng)元和損傷神經(jīng)元，但損傷神經(jīng)元在腦缺血組明顯多于預(yù)處理組和干預(yù)組，預(yù)處理組損傷神經(jīng)元明顯多于干預(yù)組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義(P<0.05)。 4．腦缺血后在海馬區(qū)可見大量IL-6陽性細(xì)胞表達(dá)，12h時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)并逐漸增多，在48h達(dá)到高峰后逐漸減少，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較具有顯著差異(P<0.01)。在相同缺血后時(shí)間點(diǎn)，預(yù)處理組較缺血組IL-6陽性表達(dá)明顯降低(P<0.05)，干預(yù)組較缺血組及預(yù)處理組IL-6陽性表達(dá)均明顯降低(P<0.05)。 5．在腦缺血后12h，Ngb在皮質(zhì)區(qū)即有大量表達(dá)，24h達(dá)到高峰后數(shù)量逐漸下降，同組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較有顯

8、著差異(P<0.01)，預(yù)處理組較缺血組Ngb表達(dá)明顯增多(P<0.01)，干預(yù)組較缺血組Ngb表達(dá)明顯增多(P<0.01)但與預(yù)處理組比較差異不大(P>0.05)。 結(jié)論 1．缺血預(yù)處理能對(duì)隨后發(fā)生的再次腦缺血所致的神經(jīng)元損傷起保護(hù)作用，減輕神經(jīng)功能缺損癥狀，減小梗死體積，使海馬區(qū)IL-6表達(dá)減少，皮質(zhì)區(qū)Ngb表達(dá)上調(diào)，并減輕神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死。 2．缺血預(yù)處理后預(yù)防性使用凱力康可以對(duì)再次嚴(yán)重腦缺血所致的神經(jīng)元