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文檔簡介
1、目的:觀察清熱化瘀顆粒對局灶性腦缺血大鼠腦內 CHOP、Gadd34蛋白的影響,探討清熱化瘀顆粒預處理對局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)元保護作用。
方法:將80只大鼠隨機分為四組,即假手術組(sham-operation,SO);MCAO組:假手術+腦缺血組(SO+MCAO);BIP組:預缺血+腦缺血組(BIP+MCAO)。QRHY組:預缺血+清熱化瘀顆粒+腦缺血組(BIP+QRHY+MCAO);每組20只。每組按照再缺血后12h、1
2、d、2d、3d四個時間點平均分為4個亞組(n=5)。采用大鼠大腦中動脈二次線栓法制備大鼠腦缺血預處理模型,分別作如下處理:假手術組(SO組):以假手術代替預缺血及缺血再灌注,線栓只插入頸內動脈9mm,然后正常飼養(yǎng),自由飲水;MCAO組:以假手術代替預缺血,其余步驟同腦缺血預處理組,動物造模后正常飼養(yǎng),自由飲水,灌胃等體積的生理鹽水;BIP組:MCAO10min后抽出栓線,完成預缺血;3d后再次行MCAO2h,灌胃等量生理鹽水,再灌注后1
3、2h、1d、2d、3d處死;QRHY組:缺血預處理10min后,在大鼠麻醉清醒后1h灌胃清熱化瘀顆粒溶液,按每次1.4m1/100g給藥,其濃度及等效劑量按體表面積折算,連續(xù)3d,每天上、下午各一次。3d后給予2hMCAO,再灌注后12h、1d、2d、3d處死;造模后取材,常規(guī)HE染色并在光學顯微鏡下觀察各組腦組織病理形態(tài)學改變,應用免疫組織化學方法檢測CHOP、Gadd34蛋白在大鼠梗死灶表達的變化。
結果:各組均可見CHO
4、P、Gadd34蛋白表達,主要在梗死區(qū)周圍皮層,陽性表達為細胞胞漿呈棕黃色,多數(shù)陽性細胞發(fā)生形態(tài)學改變,胞核皺縮,呈梭形或條索狀。圖像分析結果顯示:假手術組大鼠大腦頂葉皮層有少量CHOP、Gadd34蛋白陽性細胞表達。MCAO組大鼠腦缺血再灌注后CHOP、Gadd34蛋白表達平均灰度值明顯下降,表明其蛋白陽性數(shù)明顯增多(P<0.01)。
對于CHOP蛋白,再灌注1d其平均灰度值降至最低,表明其陽性細胞表達達高峰(P<0.01)
5、,至再灌注2d其蛋白表達平均灰度值仍高。BIP組能明顯升高大鼠缺血再灌注損傷后 CHOP蛋白表達平均灰度值水平,即能降低陽性細胞表達數(shù),與MCAO組比較,BIP組大鼠12h至1d CHOP蛋白表達平均灰度值明顯上升(P<0.01)。清熱化瘀顆粒預處理組表達較單純缺血再灌注組低(P<0.01),與BIP組比較,大鼠1d CHOP蛋白表達平均灰度值明顯上升(P<0.05),且與腦組織病理形態(tài)學改變相一致。說明清熱化瘀顆粒預處理能夠抑制梗死后
6、CHOP表達。
對于Gadd34蛋白,再灌注12h其平均灰度值降至最低,表明其陽性細胞表達達高峰(P<0.01),至再灌注1d其蛋白表達平均灰度值開始升高。BIP組及QRHY組與MCAO組比較,1d至2d Gadd34蛋白表達平均灰度值明顯下降(P<0.01),且兩組再灌注1d其平均灰度值降至最低,表明其陽性細胞表達達高峰(P<0.01),1d至2d均能持續(xù)性表達(P<0.01),至3d時蛋白表達平均灰度值開始升高(P<0.0
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