全饑餓對腦皮質(zhì)細(xì)胞凋亡及相關(guān)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究全饑餓狀態(tài)對大腦皮層細(xì)胞凋亡及其相關(guān)因子Bcl-2，Bax，Caspase-3的表達(dá)影響。
　　方法:成年雄性SD大鼠，健康清潔級90只，350±30g，隨機(jī)分為6組（每組15只）：正常對照組（即正常進(jìn)食組），饑餓組為五組即3d組、5d組、7d組、9d組、11d組。其后又將每一組隨機(jī)分為三個亞組I、II、III組，每一個亞組5只。其中每一組I組應(yīng)用蘇木素-伊紅染色法觀測大腦皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)變化，采用TUNEL法檢測凋

2、亡細(xì)胞，然后利用圖像分析儀來計(jì)算凋亡細(xì)胞表達(dá)數(shù)和凋亡指數(shù)，以此推測全饑餓狀態(tài)下大腦功能的變化。II組大鼠皮質(zhì)區(qū) Bcl-2、Bax、Caspase-3三種因子表達(dá)的信使核糖核酸及蛋白，其表達(dá)情況利用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)和免疫印跡試驗(yàn)來檢測觀察，以研究急性全饑餓對大鼠腦皮質(zhì)區(qū)凋亡相關(guān)因子的影響。III組大鼠在不同饑餓時限時腦組織含水量變化利用干濕重比法來檢測觀察，以便我們了解在這種情況下腦組織是否存在脫水情況。
　　結(jié)果:
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3、.大鼠一般行為觀察饑餓3d和饑餓5d組大鼠的一般狀態(tài)良好，饑餓后期即饑餓7d、9d、11d組，大鼠的一般狀況極度變差，精神狀態(tài)較萎靡，對刺激反應(yīng)遲鈍。
　　2.大鼠重量的變化饑餓前，各組大鼠之間對其機(jī)體重量進(jìn)行兩兩對比，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。隨著饑餓時間的增加，大鼠的體重不斷減輕。
　　3.皮質(zhì)區(qū)HE染色形態(tài)學(xué)比較結(jié)果光鏡下（×400）組織形態(tài)觀察可見：正常對照組、饑餓3d組和饑餓5d組大鼠皮質(zhì)區(qū)的細(xì)胞清晰飽滿，形

4、態(tài)完整，分布緊密規(guī)則，細(xì)胞質(zhì)染色深，分布均勻，細(xì)胞核居中，有明顯大量的神經(jīng)纖維。隨著饑餓時間的延長，饑餓7d、9d、11d組大鼠皮質(zhì)區(qū)細(xì)胞排列極其稀疏紊亂，細(xì)胞線不清，細(xì)胞間隙增寬，間質(zhì)水腫疏松，神經(jīng)細(xì)胞丟失、細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，尼氏體減少，細(xì)胞質(zhì)染色淡，細(xì)胞壞死增多。
　　4.皮質(zhì)區(qū)細(xì)胞凋亡的檢測結(jié)果與正常對照組相比，皮質(zhì)區(qū)凋亡細(xì)胞百分率，饑餓3d組無顯著差異（P＞0.05）；饑餓5d組稍有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而饑

5、餓后期7d、9d、11d組凋亡細(xì)胞百分比增加有顯著差異（P＜0.01）。說明在饑餓早期，即饑餓3d時，大鼠皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡較少，饑餓5d組略有增加，而在饑餓后期，即饑餓7d、9d、11d時，大鼠皮質(zhì)區(qū)凋亡細(xì)胞的數(shù)目明顯增多。
　　5.逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)檢測大腦皮質(zhì)區(qū)在全饑餓狀態(tài)下，三種凋亡相關(guān)因子其mRNA的表達(dá)結(jié)果與實(shí)驗(yàn)正常對照組相比，饑餓3d組Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)無明顯增高（P＞0.05），而饑餓5d、7d

6、、9d、11d組Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表達(dá)均顯著增加(P＜0.01)；饑餓3d、5d、7d組Bcl-2 mRNA的表達(dá)均增高（P＜0.05），5d組表達(dá)量最高（P＜0.01），9d、11d組表達(dá)降低（P＜0.05），11d組表達(dá)量最低（P＜0.01）。
　　6.免疫印跡試驗(yàn)檢測大腦皮質(zhì)區(qū)在全饑餓狀態(tài)下，三種凋亡相關(guān)因子其蛋白的表達(dá)結(jié)果與對照組相比，饑餓3d組Bax蛋白、Caspase-3蛋白表達(dá)無增加（P＞

7、0.05），饑餓5d組Caspase-3蛋白表達(dá)增加（P＜0.05），Bax蛋白表達(dá)明顯增多（P＜0.01），饑餓后期組7d、9d、11d組Bax蛋白和Caspase-3蛋白表達(dá)均顯著增加（P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；饑餓3d、5d、7d組Bcl-2蛋白的表達(dá)均明顯增高（P＜0.01），5d組表達(dá)量最高，9d、11d組表達(dá)降低，11d組表達(dá)量最低（P＜0.01）。
　　7.干濕比重法各饑餓組的腦組織含水量與正常對照組相比，3

8、d組增加不明顯（P＞0.05），5d組明顯增加（P＜0.01），饑餓后期（7d、9d、11d）組均下降（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1.全饑餓狀態(tài)下大鼠皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加從饑餓第5d開始存在。
　　2.在全饑餓狀態(tài)下，短期饑餓應(yīng)激可能有一定的腦保護(hù)作用，而長期饑餓應(yīng)激引起大量皮質(zhì)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腦功能受損，應(yīng)積極的預(yù)防和治療。
　　3.在全饑餓狀態(tài)下，Bcl-2、Bax、Caspase-3因子在凋亡調(diào)控中