ELMO1對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬作用及炎癥反應(yīng)中相關(guān)因子表達(dá)的影響.pdf

1、ELMO1（Engulfment and cell motility protein1，ELMO1）基因位于人第七號(hào)染色體上，在小鼠細(xì)胞內(nèi)定位在第十三號(hào)染色體，編碼的ELMO1蛋白在細(xì)胞的遷移和吞噬過(guò)程中扮演著重要的角色，失控的細(xì)胞遷移和吞噬會(huì)導(dǎo)致炎癥相關(guān)疾病的發(fā)生甚至腫瘤轉(zhuǎn)移。巨噬細(xì)胞由來(lái)源于骨髓的單核細(xì)胞分化而來(lái)，機(jī)體所有組織中都有這種細(xì)胞的存在，且它還是造血系統(tǒng)中可塑性最強(qiáng)的一種免疫細(xì)胞。巨噬細(xì)胞既是機(jī)體非特異性免疫的重要組成細(xì)胞

2、，也在特異性免疫反應(yīng)中有著呈遞抗原的作用，是體內(nèi)一種具有多種功能和用途的細(xì)胞，這些多樣性功能賦予它在正常發(fā)育、體內(nèi)平衡、組織修復(fù)和對(duì)病原菌的免疫反應(yīng)中有不同作用。在非特異性免疫中，它能通過(guò)吞噬作用除去機(jī)體中侵入的病原菌和死細(xì)胞以及碎片;在特異性免疫反應(yīng)中攝取并遞呈外援性異物，通過(guò)分泌細(xì)胞因子和趨化因子誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。幾乎每一種人類疾病都涉及到巨噬細(xì)胞，它們也被作為主要的治療目標(biāo)，因?yàn)樗鼈兊倪@些多樣性功能可以被定向的加強(qiáng)或抑制，以改變

3、疾病的結(jié)果。LPS刺激巨噬細(xì)胞后，通過(guò)TLR4受體激活調(diào)控細(xì)胞內(nèi)炎癥因子相關(guān)基因的表達(dá)。ELMO1基因參與細(xì)胞的遷移和吞噬作用，而巨噬細(xì)胞在機(jī)體的固有免疫和適應(yīng)性免疫中發(fā)揮重要作用，為了探究ELMO1是否可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的吞噬作用和分泌功能，以及涉及到哪些分子機(jī)制。首先，實(shí)驗(yàn)室通過(guò)構(gòu)建了ELMO1基因的干涉載體PLVX-shRNA及其對(duì)照質(zhì)粒，包被慢病毒后感染RAW264.7細(xì)胞系，擴(kuò)大培養(yǎng)后用流式細(xì)胞儀分選出穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系，采用鏡下

4、觀察細(xì)胞形態(tài)，然后用穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的細(xì)胞去吞噬標(biāo)記熒光標(biāo)簽的大腸桿菌顆粒，流式細(xì)胞儀分析吞噬效率。然后，本實(shí)驗(yàn)室成功建立ELMO1基因敲除小鼠，從小鼠腹腔取得原代巨噬細(xì)胞或者由小鼠骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)分化而來(lái)的巨噬細(xì)胞先用流式細(xì)胞儀檢測(cè)純度或分化效率，再通過(guò)吞噬指數(shù)法去檢測(cè)野生型和敲除型吞噬效率，并從蛋白水平檢測(cè)LPS刺激后炎癥因子的表達(dá)情況。
　　結(jié)果表明:ELMO1基因表達(dá)降低后細(xì)胞的吞噬能力變?nèi)?在小鼠的原代巨噬細(xì)胞中，敲除型細(xì)胞內(nèi)