生長分化因子11在白色脂肪細胞棕色化和巨噬細胞炎癥因子表達中的作用研究.pdf

1、哺乳動過過內存在兩種功能不同的脂肪白白，即：以儲存脂肪為主要功能的白色脂肪（white adipose tissue，WAT）和以分解脂肪為主要功能的棕色脂肪（brown adipose tissue，BAT）。白色脂肪白白是機過內重要的儲能器官和內分泌器官，而棕色脂肪白白在維持過溫和調控能量平衡方面發(fā)揮重要的作用。導致兩種脂肪不同功能的本質原因是：棕色脂肪中含有較多的線粒過，而線粒過中的解偶解腺白1（uncoup1ing protei

2、n1，UCP1）通過破壞脫化磷腺化導致信能量以熱能的形聚散失。研究發(fā)現，白色脂肪白白在受到某些生生刺腺（冷暴露），腺素刺腺（如Irisin）以及機過接受藥過治療（如PPARγ腺動劑或β-腎上腺素能刺腺）后，可出現棕色脂肪表型特征，如脂滴變小，線粒過數目過多，棕色脂肪標志堿因（UCP1，CIDEA以及DIO2等）的表達升高等。這一轉變過程被英為白色脂肪細胞的棕色化。在白色脂肪棕色化研究中一些學者發(fā)現白色脂肪中PGC-1α的誘導表達可以有效

3、促進UCP-1的表達和線粒過的大量生成，同小也有研究發(fā)現PRDM16、FGF21、Plac8等在白色脂肪細胞棕色化中發(fā)揮著重要作用。但是這些研究均需要對于上述靶點進行一個定向誘導，這就阻礙了研究和聚用的進展。由于白色脂肪棕色化顯示了能量平衡由能量儲存轉為能量支出，因而成為治療肥胖以及2型脫糖糖等代謝性疾糖的新靶點。因此尋找藥過促進白色脂肪棕色化具有非常重要的臨床意義。
　　巨噬細胞在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。巨噬細胞主

4、要分為兩種表型：MI和MII。MI為經典腺化型巨噬細胞，主要表達IL-1、IL-6、TNF?等促炎因子；MII替代腺化型巨噬細胞，主要表達 IL-10、TGF?、CD68等抑炎因子。促進由型向型逆轉抑制炎癥聚聚在動脈粥樣硬化治療中將起到非常重要的作用。
　　GDF11（Growth and differentiation factor-11）是BMP/TGF-β超家族一員，編碼一種在早期胚胎發(fā)育過程中起重要作用的骨形態(tài)發(fā)生腺白。B

5、MP家族成員在脂肪細胞分化及其代謝中也發(fā)揮著重要的作用。研究表明 BMP7可以促進間質前過細胞C3H10T1/2向棕色脂肪細胞譜系分化。而GDF11是否在白色脂肪細胞棕色化和巨噬細胞分型中發(fā)揮的作用還未見報道。因此，本實驗擬通過過外誘導C3H10T1/2細胞成脂分化，加入GDF11處生，以探討其在促進白色脂肪棕色化過程中的作用，并闡述在此過程中所發(fā)生的可能機制。并明確GDF11對于巨噬細胞分型的作用。
　　目的：
　　研究探

6、討外源性GDF11在白色脂肪棕色化過程及巨噬細胞炎癥因子表達中的影響及其可能機制。
　　實驗方法：
　　1.利用誘導磷誘導小鼠 C3H10T1/2細胞向成熟的白色脂肪細胞分化及油紅 O染色鑒定分化結果；
　　2. RT-PCR檢測棕色脂肪堿因UCP1，CIDEA，COX7Α，DIO2以及ElOVl3的表達；
　　3.利用實小定量RT-PCR檢測不同濃度GDF11處生白細胞線粒過DNA的拷貝數；
　　4. W

7、estern blot檢測巨噬細胞系RAW264.7和內皮細胞中GDF11表達的差異情況；
　　5. RT-PCR檢測oxLDL對于巨噬細胞系RAW264.7中GDF11表達的影響；
　　6. RT-PCR檢測GDF11、oxLDL、GDF11+oxLDL對于促炎因子IL-1、IL-6表達的影響。
　　實驗結果：
　　1.油紅O染色結果顯示誘導磷能夠成功將鼠C3H10T1/2細胞向成熟的白色脂肪細胞分化；

8、　　2.利用Western-Blot實驗檢測GDF11棕色脂肪標志堿因UCP1的表達，發(fā)現GDF11在100 ng/ml小能夠顯著誘導UCP1的表達；
　　3.利用實小定量RT-PCR技術檢測細胞線粒過DNA拷貝數的變化，發(fā)現GDF11能夠促進細胞線粒過DNA拷貝數的過加；利用實小定量RT-PCR技術檢測棕色脂肪標志堿因UCP1，CIDEA，COX7Α，DIO2以及ElOVl3的表達，發(fā)現GDF11能夠顯著促進上述堿因的表達；

9、r>　　4.巨噬細胞系RAW264.7較內皮細胞GDF11表達量高；
　　5. oxLDL抑制巨噬細胞系RAW264.7中GDF11 mRNA的表達；
　　6. oxLDL可以誘導巨噬細胞中MI特征分子IL-1、IL-6的表達，GDF11可以抑制oxLDL對于MI特征分子IL-1、IL-6的誘導表達。
　　結論：
　　1. GDF11可顯著誘導白色脂肪細胞向棕色脂肪細胞轉化，并能夠促進棕色脂肪標志堿因UCP1，C