2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  觀察轉(zhuǎn)染PTEN干擾RNA(PTEN siRNA)對脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(NR8383)腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表達(dá)的影響,探討PTEN對肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用及可能機(jī)制。
  方法:
  1.體外培養(yǎng)NR8383,將細(xì)胞分成兩組:對照組轉(zhuǎn)染Control siRNA,干擾組轉(zhuǎn)染PTEN s

2、iRNA,分別選取10nM、20nM、40nM濃度轉(zhuǎn)染24小時(shí),采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Real time fluorescent quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-qPCR)檢測轉(zhuǎn)染后兩組細(xì)胞中PTEN mRNA表達(dá),采用蛋白質(zhì)印跡法(western blot)檢測轉(zhuǎn)染后兩組細(xì)胞內(nèi)PTEN蛋白表達(dá)。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,選擇20nM為最

3、佳實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染濃度。
  2.將NR8383細(xì)胞分成兩組:對照組轉(zhuǎn)染Control siRNA,干擾組轉(zhuǎn)染PTEN siRNA,轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,兩組細(xì)胞分別用終濃度1μg/ml LPS刺激細(xì)胞6小時(shí),采用RT-qPCR檢測兩組細(xì)胞內(nèi)TNF-αmRNA表達(dá),采用western blot檢測兩組細(xì)胞內(nèi)AKT磷酸化水平,采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測兩組細(xì)胞培養(yǎng)上清

4、液中TNF-α蛋白的表達(dá)變化。
  結(jié)果:
  1.與對照組比較,10nM、20nM和40nM干擾組PTEN mRNA表達(dá)分別下調(diào)至(0.33±0.01)倍(P<0.01)、(0.23±0.01)倍(P<0.01)、(0.21±0.01)倍(P<0.01);PTEN蛋白表達(dá)分別下降至(0.30±0.03)倍(P<0.01)、(0.14±0.02)倍(P<0.01)、(0.10±0.02)倍(P<0.01);在干擾組中,與10

5、nM濃度比較,20nM、40nM濃度PTEN蛋白表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。20nM與40nM濃度比較,PTEN蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.08)。
  2.兩組細(xì)胞LPS刺激6小時(shí)后,與對照組比較,p-AKT/AKT蛋白比值從(0.26±0.02)表達(dá)上升至(0.52±0.03)倍(P<0.01),干擾組細(xì)胞中TNF-αmRNA表達(dá)上調(diào)至(1.56±0.18)倍(P<0.01)。Control siRNA+LPS對照

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