雙丹組分丹酚酸B與丹皮酚對心肌缺血再灌注損傷大鼠的機制研究.pdf

1、目的：以傳統(tǒng)中藥復(fù)方雙丹制劑的有效活性成分丹酚酸B(SalB)和丹皮酚(Pae)為基礎(chǔ)，采用基線等比增減法進行配伍設(shè)計，觀察不同配比組合對體外實驗離體血管舒張和心肌細胞缺氧/復(fù)氧損傷的影響，同時觀察不同配比組合對急性心肌缺血再灌注損傷（MI/RI）模型的影響，并最終獲得SalB/Pae對MI/RI最佳保護配比組合；同時通過Western blot方法觀察SalB/Pae最佳配比組合對大鼠內(nèi)皮細胞P-選擇素的干預(yù)作用，從而希望為研制出機理

2、和適應(yīng)癥相對較明確的新型中藥復(fù)方提供一些研究思路和方法。
　　 方法：本文主要在整體、器官、細胞和分子水平上探討了SalB/Pae對MI/RI的影響；采用離體血管舒張實驗觀察Pae/SalB的不同配比組合對SD大鼠離體血管舒張程度的影響；細胞水平上主要比較SalB/Pae的不同配比組合對原代心肌細胞缺氧再復(fù)氧損傷的影響，培養(yǎng)36h時可觀察到明顯心肌細胞搏動，此時開始進行缺氧1h和再復(fù)氧3h模擬缺血再灌注損傷，缺氧損傷前3小時分別

3、加入不同配比組合，觀察心肌細胞的活力、細胞凋亡率和細胞內(nèi)MDA表達水平；再采用急性心肌缺血再灌注損傷實驗分別比較不同配比組合對急性MI/RI的影響，ip給藥連續(xù)3d，結(jié)扎左冠狀動脈前降支，缺血30min后再灌注120min，分別比較SalB/Pae不同配比組合對SOD， MDA， NO， CK-MB，心肌梗死面積，心電∑-ST和組織形態(tài)等的影響；并通過Western bl ot檢測了SalB/Pae最佳配比對SD大鼠急性心肌缺血再灌注損

4、傷中起始損傷黏附關(guān)鍵介導(dǎo)分子P-選擇素的表達的變化，以探討SalB/Pae對MI/RI的可能保護作用機制。
　　 結(jié)果：
　　 1．離體血管舒張實驗：SalB和Pae不同配比組合對大鼠離體血管均具有明顯的舒張作用，與SalB/Pae4／0及0／4組比較，3／1和2／2組合對大鼠離體血管都有明顯舒張作用，其中以3／1舒張效果最佳。
　　 2．原代心肌細胞培養(yǎng)缺氧再復(fù)氧損傷實驗：SalB， Pae和SalB/Pae(

5、3／1)分別在濃度為1mg·mL-1，100μg·mL-1，10μg·mL-1，1μg·mL-1時對心肌細胞的損傷有一定的保護作用，在SalB/Pae(3／1)濃度為10μg·mL-1時MTT測得心肌細胞活力最高；在SalB， Pae和SalB/Pae(3／1)濃度分別為1mg·mL-1，100μg·mL-1，10μg·mL-1，1μg·mL-1時對心肌細胞凋亡有一定的保護作用，當SalB/Pae(3／1)濃度為10μg·mL-1時細胞

6、凋亡程度最低：在SalB/Pae(3／1)濃度分別為100μg·mL-1，10μg·mL-1時對心肌細胞MDA的降低作用最明顯。
　　 3．急性心肌缺血再灌注損傷實驗：各不同配比組合與模型組相比較，梗死程度均低于模型組；組間比較，SalB/Pae3／1組和1／1組分別與丹酚酸B單方組和丹皮酚單方組具有顯著性差異，梗死程度都低于丹酚酸B單方組和丹皮酚單方組，其中以SalB／Pae3:1組效果梗死程度最低；心電∑-ST、 MDA和C

7、K-MB觀察結(jié)果顯示SalB/Pae3:1組低于其它組別，NO和SOD觀察結(jié)果顯示SalB/Pae3:1組明顯高于其它組別。
　　 4．Western blot: Western blot結(jié)果進一步顯示，與模型組比較，最佳配比組合組結(jié)果顯示SalB/Pae(3／1)組P-選族素表達較低，模型組P-選擇素表達明顯高于假手術(shù)組，差異顯著。
　　 結(jié)論
　　 1、丹皮酚和丹酚酸B配比組合對大鼠離體血管的舒張和原代心肌細

8、胞缺氧再復(fù)氧損傷都具有一定的保護作用，且配比組合的保護效果優(yōu)于各單方組的保護效果；
　　 2、丹皮酚和丹酚酸B配比組合對大鼠的急性心肌缺血再灌注損傷有明顯保護作用，在丹酚酸B和丹皮酚之比為3:1時保護效果最佳，這說明丹酚酸B和丹皮酚兩者在保護大鼠急性心肌缺血再灌注損傷方面可能存在某種協(xié)同或相加作用。
　　 3、丹皮酚和丹酚酸B配比組合對大鼠心肌缺血再灌注損傷過程中P-選擇素也具有一定的調(diào)節(jié)作用，這說明其保護作用機制可能與