HNP-1誘導(dǎo)pDC細(xì)胞活化機(jī)制以及在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中應(yīng)用的研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　防御素是抗微生物肽的一個(gè)主要家族成員，是由白細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生的內(nèi)源性的，富含半胱氨酸的小分子抗微生物肽。近年來積累了大量的證據(jù)表明，哺乳動(dòng)物防御素是多功能的，并且通過與宿主細(xì)胞受體相互作用，參與宿主的固有和適應(yīng)性抗微生物免疫反應(yīng)。人中性粒細(xì)胞肽-1（HNP-1）是人中性粒細(xì)胞中的主要α-防御素。盡管最初被定義為一種抗微生物肽，HNP-1隨后被發(fā)現(xiàn)對(duì)免疫系統(tǒng)的白細(xì)胞具有許多功能。HNP-1在體外對(duì)人的T細(xì)胞具

2、有趨化作用，并且招募人的 T細(xì)胞至體內(nèi)的感染位點(diǎn)。HNP-1具有誘導(dǎo)體外人單核細(xì)胞或體內(nèi)呼吸道產(chǎn)生腫瘤壞死因子的能力。HNP-1被報(bào)道能夠誘導(dǎo)人單核細(xì)胞來源的DCs表型和功能成熟。由于具有 DC-趨化和激活效應(yīng)，HNP-1被列為警報(bào)素家族的一員，內(nèi)源性介質(zhì)能夠招募和激活 DCs，從而激活先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。然而，它是否能夠激活人的pDC細(xì)胞還不確定。
　　本研究第一部分觀測(cè) HNP-1引起人的 pDC細(xì)胞活化情況，并通過 EL

3、ISA和real time PCR的方法檢測(cè)引起的IFN-α表達(dá)的量。接下來通過觀察IRFs和NF-κB的核移位研究HNP-1活化pDC細(xì)胞的分子機(jī)制。進(jìn)一步研究HNP-1在體內(nèi)發(fā)揮的作用。本研究第二部分通過檢測(cè)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜液中 HNP-1以及pDC細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的表達(dá)，探討HNP-1的臨床意義，為臨床治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎提供新的思路和靶點(diǎn)。
　　研究方法：
　　1.應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)HNP-1誘導(dǎo)的CAL-1細(xì)胞

4、和人的pDC細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中IFN-α的濃度。
　　2.利用定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HNP-1誘導(dǎo)的CAL-1細(xì)胞和人的pDC細(xì)胞中IFN-α和IFNβ1的基因表達(dá)情況。
　　3.應(yīng)用Western blot的方法檢測(cè)CAL-1細(xì)胞中IRF-1，NF-κB p50，p65蛋白的表達(dá)水平。
　　4.應(yīng)用小RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染CAL-1細(xì)胞后，IRF-1的蛋白水平明顯下降。
　　5.應(yīng)用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)中性粒細(xì)胞和人的pD

5、C細(xì)胞的濃度。
　　結(jié)果：
　　1. HNP-1能夠誘導(dǎo)pDC細(xì)胞活化產(chǎn)生IFN-α和IFNβ1，而且是劑量依賴關(guān)系， HNP-1是pDC細(xì)胞的激活劑。
　　2.HNP-1促進(jìn)GpG ODN誘導(dǎo)的pDC細(xì)胞活化產(chǎn)生IFN-α和IFNβ1。
　　3.HNP-1能夠誘導(dǎo)CAL-1細(xì)胞活化產(chǎn)生IFN-α，HNP-1促進(jìn)GpG ODN誘導(dǎo)的CAL-1細(xì)胞活化產(chǎn)生IFN-α。
　　4. HNP-1激發(fā)CAL-1細(xì)胞的

6、NF-κB和IRF-1信號(hào)通路。
　　5. BAY-11-7082阻斷NF-κB的激活，抑制HNP-1誘導(dǎo)的pDC細(xì)胞IFN-α，IFNβ1和IL-6促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
　　6.降表達(dá)IRF-1后抑制HNP-1誘導(dǎo)的pDC細(xì)胞IFN-α，IFNβ1和IL-6促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
　　7. SCID小鼠實(shí)驗(yàn)證實(shí)HNP-1不僅在體外能夠誘導(dǎo)人的pDC細(xì)胞的活化，在體內(nèi)同樣可以活化人的pDC細(xì)胞，使其產(chǎn)生大量的IFN-α。

7、
　　8.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜液中的中性粒細(xì)胞和pDC細(xì)胞顯著增多，而且含有大量的HNP-1蛋白。
　　結(jié)論：
　　1. HNP-1誘導(dǎo)體外pDC細(xì)胞活化。
　　2. HNP-1激發(fā)NF-κB和IRF-1信號(hào)通路。
　　3. NF-κB和IRF-1對(duì)HNP-1誘導(dǎo)的pDC細(xì)胞活化起重要作用。
　　4. HNP-1誘導(dǎo)SCID小鼠體內(nèi)pDC細(xì)胞的活化。
　　5.中性粒細(xì)胞，HNP-1，和pDC共同