HNP-1誘導pDC細胞活化機制以及在類風濕關節(jié)炎中應用的研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　防御素是抗微生物肽的一個主要家族成員，是由白細胞和上皮細胞產生的內源性的，富含半胱氨酸的小分子抗微生物肽。近年來積累了大量的證據(jù)表明，哺乳動物防御素是多功能的，并且通過與宿主細胞受體相互作用，參與宿主的固有和適應性抗微生物免疫反應。人中性粒細胞肽-1（HNP-1）是人中性粒細胞中的主要α-防御素。盡管最初被定義為一種抗微生物肽，HNP-1隨后被發(fā)現(xiàn)對免疫系統(tǒng)的白細胞具有許多功能。HNP-1在體外對人的T細胞具

2、有趨化作用，并且招募人的 T細胞至體內的感染位點。HNP-1具有誘導體外人單核細胞或體內呼吸道產生腫瘤壞死因子的能力。HNP-1被報道能夠誘導人單核細胞來源的DCs表型和功能成熟。由于具有 DC-趨化和激活效應，HNP-1被列為警報素家族的一員，內源性介質能夠招募和激活 DCs，從而激活先天性和適應性免疫反應。然而，它是否能夠激活人的pDC細胞還不確定。
　　本研究第一部分觀測 HNP-1引起人的 pDC細胞活化情況，并通過 EL

3、ISA和real time PCR的方法檢測引起的IFN-α表達的量。接下來通過觀察IRFs和NF-κB的核移位研究HNP-1活化pDC細胞的分子機制。進一步研究HNP-1在體內發(fā)揮的作用。本研究第二部分通過檢測類風濕關節(jié)炎患者滑膜液中 HNP-1以及pDC細胞、中性粒細胞的表達，探討HNP-1的臨床意義，為臨床治療類風濕關節(jié)炎提供新的思路和靶點。
　　研究方法：
　　1.應用ELISA方法檢測HNP-1誘導的CAL-1細胞

4、和人的pDC細胞培養(yǎng)基上清液中IFN-α的濃度。
　　2.利用定量PCR實驗檢測HNP-1誘導的CAL-1細胞和人的pDC細胞中IFN-α和IFNβ1的基因表達情況。
　　3.應用Western blot的方法檢測CAL-1細胞中IRF-1，NF-κB p50，p65蛋白的表達水平。
　　4.應用小RNA干擾技術轉染CAL-1細胞后，IRF-1的蛋白水平明顯下降。
　　5.應用流式細胞計數(shù)檢測中性粒細胞和人的pD

5、C細胞的濃度。
　　結果：
　　1. HNP-1能夠誘導pDC細胞活化產生IFN-α和IFNβ1，而且是劑量依賴關系， HNP-1是pDC細胞的激活劑。
　　2.HNP-1促進GpG ODN誘導的pDC細胞活化產生IFN-α和IFNβ1。
　　3.HNP-1能夠誘導CAL-1細胞活化產生IFN-α，HNP-1促進GpG ODN誘導的CAL-1細胞活化產生IFN-α。
　　4. HNP-1激發(fā)CAL-1細胞的

6、NF-κB和IRF-1信號通路。
　　5. BAY-11-7082阻斷NF-κB的激活，抑制HNP-1誘導的pDC細胞IFN-α，IFNβ1和IL-6促炎細胞因子的產生。
　　6.降表達IRF-1后抑制HNP-1誘導的pDC細胞IFN-α，IFNβ1和IL-6促炎細胞因子的產生。
　　7. SCID小鼠實驗證實HNP-1不僅在體外能夠誘導人的pDC細胞的活化，在體內同樣可以活化人的pDC細胞，使其產生大量的IFN-α。

7、
　　8.類風濕關節(jié)炎患者滑膜液中的中性粒細胞和pDC細胞顯著增多，而且含有大量的HNP-1蛋白。
　　結論：
　　1. HNP-1誘導體外pDC細胞活化。
　　2. HNP-1激發(fā)NF-κB和IRF-1信號通路。
　　3. NF-κB和IRF-1對HNP-1誘導的pDC細胞活化起重要作用。
　　4. HNP-1誘導SCID小鼠體內pDC細胞的活化。
　　5.中性粒細胞，HNP-1，和pDC共同