抗生素對腹膜間皮細胞的影響的觀察.pdf

1、目的：通過觀察抗生素對體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細胞的增殖情況、細胞產(chǎn)生細胞因子轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming Growth Factor-βi，TGF-βi)、及細胞超微形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，探討通過腹腔內(nèi)給藥的方式使用抗生素與腹膜纖維化之間的關(guān)系。
　　 方法：從持續(xù)不臥床腹膜透析(Continuous Ambulatory Peritoneal Dialysis，CAPD)患者透出液中提取腹膜間皮細胞進行原代培養(yǎng)，培養(yǎng)的

2、細胞經(jīng)過生長形態(tài)觀察、免疫組化、電鏡超微結(jié)構(gòu)的觀察鑒定，確定為間皮細胞，細胞傳代后分別加入不同濃度的頭孢拉定、頭孢曲松和左氧氟沙星三種抗生素，并設(shè)置無藥對照組，分別培養(yǎng)12h和24h，用四甲基偶氮唑鹽比色(MTT)法測定細胞增殖情況，用酶聯(lián)免疫吸附實驗(Elisa)法測定細胞上清中TGF-β1的含量，用透射電鏡觀察細胞結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：
　　 從CAPD患者透出液中分離出的細胞經(jīng)過培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡觀察結(jié)果示;細胞呈

3、多形性，多為梭形，細胞生長融合時呈鋪路石樣改變。免疫組化結(jié)果示：鼠抗人角蛋白抗體、鼠抗人波形蛋白抗體為陽性胞漿表達；兔抗人Ⅷ因子抗體、鼠抗人白細胞CD45抗體為陰性表達。掃描電鏡結(jié)果：放大30k倍后見細胞表面豐富的微絨毛。透射電鏡：細胞表面豐富的微絨毛，胞漿內(nèi)可見豐富的內(nèi)度網(wǎng)和囊泡，放大12K倍的細胞可見表面微絨毛，細胞內(nèi)細胞器豐富完整。
　　 加入抗生素培養(yǎng)細胞24小時后透射電鏡觀察見：細胞器腫脹，結(jié)構(gòu)不清，少許空泡樣結(jié)構(gòu)，甚

4、至出現(xiàn)細胞凋亡。
　　 MTT結(jié)果：左氧氟沙星組：與對照組比較，12小時和24小時均在藥物濃度為40mg/L及以上時吸光光度值明顯減少，具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。頭孢拉定組：與對照組比較，12小時藥物濃度為100mg/L及以上時吸光光度值減少具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01);而24小時，當(dāng)藥物濃度為10mg/L及以上吸光光度值減少具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。頭孢曲松組：與對照組比較，12小時藥物濃度為1000mg/L及以

5、上時吸光光度值減少具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)；而24小時，當(dāng)藥物濃度為10mg/L及以上時即可見吸光光度值減少具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。
　　 TGF-β1含量測定結(jié)果：左氧氟沙星組：12小時，藥物濃度為80mg/L及以上時，上清液中TGF-β1的量較對照組增多，有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.01):24小時，當(dāng)藥物濃度為40mg/L及以上時，上清液中TGF-βi的量較對照組增多，具有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.01)。頭孢拉定組

6、：12小時和24小時均為藥物濃度100mg/L及以上時，上清液中TGF-βi的量較對照組明顯增多，有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.01)。頭孢曲松組：12小時和24小時均為藥物濃度為100mg/L及以上時，上清液中TGF-βi的量較對照組明顯增多，有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 從CAPD患者腹膜透析透出液中分離出間皮細胞進行培養(yǎng)的方法是一種簡便而有效的方法，電鏡可從超微結(jié)構(gòu)上直接觀察細胞表面形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)，十