大鼠脂肪干細(xì)胞復(fù)合水凝膠體外多分化能力的實驗研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：分離培養(yǎng)大鼠的ADSCs，研究其體外增殖、傳代的特點以及表型特征。脂肪干細(xì)胞具有多種特異性抗原和受體，據(jù)此進行檢測和分析，有助于研究脂肪干細(xì)胞該發(fā)育階段的特性，為科學(xué)研究和臨床診治提供有用信息。
　　
　　 方法：取體質(zhì)量約120g的SD大鼠，分離其雙側(cè)腹股溝部的脂肪墊，經(jīng)Ⅰ型膠原酶消化獲得細(xì)胞，用含10％FCS的培養(yǎng)基培養(yǎng)ADSCs，以FACSCalibur流式細(xì)胞儀檢測原代ADSCs和

2、篩選標(biāo)志物表達(dá)。
　　
　　 結(jié)果：通過Ⅰ型膠原酶消化消化大鼠脂肪組織，可以獲得純度較高的脂肪干細(xì)胞，所得脂肪干細(xì)胞具有良好的增殖能力，能夠進行傳代培養(yǎng)并能保持其特性，我們獲得的大鼠脂肪干細(xì)胞經(jīng)過流式細(xì)胞儀檢測CD45、CD49d、CD56呈陰性表達(dá)， CD29、CD44、CD90呈陽性表達(dá)。
　　
　　 結(jié)論：1.自SD大鼠腹股溝取材可以獲得純度較高的ADSCs2.經(jīng)過傳代培養(yǎng)ADSCs的純度可以得

3、到進一步的提高3. ADSCs表達(dá)特異的表面分子，具備間質(zhì)干細(xì)胞的特征，具有極強的自我更新能力和多向分化潛能。
　　 第二部分目的：驗證大鼠脂肪干細(xì)胞是否具有間質(zhì)干細(xì)胞多向分化的特性，將細(xì)胞置于已知的成骨成脂誘導(dǎo)條件。探討行體外培養(yǎng)時大鼠ADSCs成脂成骨分化的能力、ADSCs復(fù)合水凝膠培養(yǎng)時其體外生長繁殖能力以及復(fù)合水凝膠時成脂成骨分化能力。
　　
　　 方法：在二維培養(yǎng)的方式下將大鼠脂肪干細(xì)胞進行成骨成脂誘

4、導(dǎo)，觀察其成骨成脂能力。以水凝膠為組織工程生物支架、脂肪干細(xì)胞為種子細(xì)胞，在三維立體培養(yǎng)物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)進行成脂成骨誘導(dǎo)分化，檢測ADSCs和水凝膠的相容性及誘導(dǎo)分化能力。
　　
　　 結(jié)果：在二維培養(yǎng)環(huán)境中，大鼠ADSCs經(jīng)過14 d的成脂誘導(dǎo)，出現(xiàn)脂肪細(xì)胞，具有成脂能力，經(jīng)過14 d的成骨誘導(dǎo)，出現(xiàn)成骨細(xì)胞，具有成骨能力。在三維立體的培養(yǎng)環(huán)境中，其成骨成脂能力仍然存在，但完成誘導(dǎo)的時間較長。
　　

5、　　 結(jié)論：1. ADSCs在二維培養(yǎng)環(huán)境中具有成脂、成骨能力，表現(xiàn)出與其他間質(zhì)干細(xì)胞相似的多分化特性。
　　 2.ADSCs與水凝膠具有較好的相容性，在水凝膠中能較好的增殖分裂；
　　 3.ADSCs在三維培養(yǎng)環(huán)境（水凝膠）中具有良好的成脂成骨能力，亦保持了其原有的多分化特性。
　　 第三部分目的：觀察ADSCs在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下成嗅鞘樣細(xì)胞分化和神經(jīng)發(fā)生的能力。
　　
　　 方法：以tra

6、nswell小室為共培養(yǎng)載體。無支架共培養(yǎng)組以脂肪干細(xì)胞接種于上室，嗅鞘細(xì)胞接種于下室，支架共培養(yǎng)組以脂肪干細(xì)胞聯(lián)合水凝膠生物支架（BD? PuraMatrix? Peptide Hydrogel）接種于上室，嗅鞘細(xì)胞接種于下室。檢測兩組細(xì)胞共培養(yǎng)12 d后其脂肪干細(xì)胞P75的表達(dá)。
　　 以水凝膠為組織工程生物支架，脂肪干細(xì)胞為種子細(xì)胞，在三維立體培養(yǎng)物的培養(yǎng)基中加入bFGF、EGF、B27，進行誘導(dǎo)分化。檢測誘導(dǎo)后種子細(xì)胞N

7、estin/Brdu的表達(dá)。
　　
　　 結(jié)果：我們研究發(fā)現(xiàn)，共培養(yǎng)12 d后無支架共培養(yǎng)組和支架共培養(yǎng)組都有部分細(xì)胞表達(dá)P75，且支架共培養(yǎng)組表達(dá)率更高。脂肪干細(xì)胞復(fù)合水凝膠培養(yǎng)10d后呈集落樣分布的細(xì)胞Nestin/Brdu陽性表達(dá)，而散在分布的細(xì)胞呈nestin陰性，Brdu陽性表達(dá)。
　　 結(jié)論：結(jié)合以前的研究結(jié)果，我們認(rèn)為，脂肪干細(xì)胞在嗅鞘細(xì)胞生長微環(huán)境中能向嗅鞘樣細(xì)胞分化；肪干細(xì)胞在水凝膠中經(jīng)神經(jīng)誘