基于DNA自組裝的納米金比色檢測(cè)DNA新方法研究.pdf

1、DNA是生物體重要的遺傳物質(zhì)，通過(guò)對(duì)DNA的檢測(cè)能實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的早期診斷和預(yù)防，不同物種的鑒定和環(huán)境的監(jiān)測(cè)保護(hù)等，因此，對(duì)DNA的檢測(cè)具有十分重要的意義。本論文以DNA檢測(cè)為主要目標(biāo)，從DNA無(wú)酶自組裝信號(hào)放大出發(fā)，提出了一種新型無(wú)酶的指數(shù)式發(fā)卡型DNA自組裝反應(yīng)，并研究通過(guò)多種方式將該反應(yīng)應(yīng)用于DNA檢測(cè)中。
　　首先，在雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的基礎(chǔ)上，本論文提出了一種新型的指數(shù)式發(fā)卡自組裝反應(yīng)，該反應(yīng)只需要四條發(fā)卡型DNA，加入引發(fā)鏈之后

2、，在自由能的驅(qū)動(dòng)下自發(fā)進(jìn)行組裝，在較短的時(shí)間內(nèi)生成一個(gè)較大的DNA聚合體。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證了該反應(yīng)的可行性;通過(guò)原子力顯微鏡進(jìn)一步表征了生成產(chǎn)物的形態(tài)。在優(yōu)化發(fā)卡型DNA的濃度和反應(yīng)時(shí)間后，形成了規(guī)則的納米微孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，孔徑分布在200nm到400nm之間。該納米微孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可以作為一種新型的DNA納米材料。
　　其次，以該納米材料作為信號(hào)放大的載體，結(jié)合熒光成像單分子檢測(cè)技術(shù)和納米金比色檢測(cè)技術(shù)，將該反應(yīng)應(yīng)用于DNA的檢測(cè)

3、中。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示納米金比色檢測(cè)技術(shù)能有效的消除背景信號(hào)的影響，實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA的靈敏檢測(cè)。在最佳反應(yīng)條件下，靶標(biāo)濃度在25-10000pM之間時(shí)，比色檢測(cè)結(jié)果成良好的線性關(guān)系，該檢測(cè)方法能在15 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)肉眼檢測(cè)25 pM的靶標(biāo)DNA，該檢測(cè)限比傳統(tǒng)的納米金比色檢測(cè)方法降低了約400倍，同時(shí)通過(guò)紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)可檢測(cè)11.2pM的靶標(biāo)DNA。另外，通過(guò)對(duì)不同錯(cuò)配靶標(biāo)的檢測(cè)，證明了該方法對(duì)單堿基突變具有良好的特異性。
　　本論文