利用DNA自組裝技術(shù)檢測DNA甲基化及腫瘤細(xì)胞.pdf

1、建立腫瘤的早期準(zhǔn)確診斷策略及有效治療方法一直是科研工作者的奮斗目標(biāo)。本文利用自組裝技術(shù)，首先合成了“頭碰頭”的金納米棒組裝體作為探針，再結(jié)合循環(huán)放大策略，構(gòu)建了一個表面等離子共振（SPR）信號放大檢測 DNA甲基化的生物傳感器，實現(xiàn)了對DNA甲基化水平的靈敏檢測，并對甲基化轉(zhuǎn)移酶（Dam MTase）的活性進行了準(zhǔn)確分析；其次利用DNA自組裝技術(shù)構(gòu)建了一種具備雙功能的DNA納米孔結(jié)構(gòu)，可以作為特異性識別癌細(xì)胞并實現(xiàn)跨膜運輸?shù)挠行Чぞ?。?/p>

2、驗結(jié)果顯示該DNA納米復(fù)合結(jié)構(gòu)能夠特異性地識別靶向腫瘤細(xì)胞并在較短時間內(nèi)成功刺破細(xì)胞膜，從而實現(xiàn)了直接殺死癌細(xì)胞的目的。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴設(shè)計了一個可以靈敏檢測DNA甲基化水平并分析Dam MTase活性的SPR生物傳感器：首先利用DNA的雜交，自組裝得到“頭碰頭”的金納米棒線性組裝體，將該高分子量的組裝體作為探針固定到芯片表面可以顯著增大 SPR角的變化；再結(jié)合剪切聚合循環(huán)放大反應(yīng)實現(xiàn)SPR響應(yīng)信號的進一步增強，最終將

3、這一傳感器用來對Dam MTase進行活性分析。該SPR生物傳感器在SPR角的變化量與Dam MTase的濃度（0.5-120 U/mL）之間呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，檢測限可以達到0.2 U/mL。因為異常的DNA甲基化水平往往預(yù)示著癌癥等疾病的發(fā)生，所以該策略為癌癥的早期診斷提供了思路，在進一步應(yīng)用于早期臨床診斷方面也有著巨大的潛力。⑵利用DNA自組裝技術(shù)合成了一種可以定向穿透細(xì)胞膜的雙功能DNA納米孔結(jié)構(gòu)并用來識別腫瘤細(xì)胞：首先運用D

4、NA自組裝技術(shù)將六條DNA單鏈混合雜交得到DNA納米孔。因為該納米孔的一端修飾有生物素，所以可以利用生物素-親和素的相互作用，將生物素修飾的人B淋巴瘤細(xì)胞（Ramos）適體和穿膜肽序列（TAT）在親和素存在的情況下固定到DNA納米孔的端部，從而得到既能特異性識別靶細(xì)胞—Ramos細(xì)胞，又能高效穿透細(xì)胞膜的雙功能納米孔。因為有5-羧基熒光素（5-FAM）修飾的DNA參與了納米孔的構(gòu)建，所以可以應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡（CLSM）對該納米結(jié)