18818.基于dna鏈取代放大技術(shù)的甲基轉(zhuǎn)移酶活性比色傳感新方法研究

1、分類(lèi)號(hào)：密級(jí)：UDC：學(xué)號(hào)：405503712086南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文基于基于DNA鏈取代放大技術(shù)的鏈取代放大技術(shù)的甲基轉(zhuǎn)移酶活性甲基轉(zhuǎn)移酶活性比色傳比色傳感新方法研究感新方法研究NewApproachofColimetricSensBasedonStrDisplacementAmplificationfMethyltransferaseActivity鐘兆花培養(yǎng)單位（院、系）：化學(xué)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱(chēng)：梁汝萍教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)

2、科門(mén)類(lèi)：理學(xué)學(xué)科專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：分析化學(xué)論文答辯日期：2015年5月31日答辯委員會(huì)主席：評(píng)閱人：2015年月日摘要I摘要DNA甲基化是最重要的表觀遺傳修飾之一，也是研究最充分的表觀遺傳學(xué)之一。甲基化過(guò)程會(huì)顯著影響基因的表達(dá)、細(xì)胞分化、轉(zhuǎn)錄沉默、X染色體失活且DNA甲基化與很多基因疾病和癌癥有著密切的聯(lián)系。不同類(lèi)型的甲基轉(zhuǎn)移酶（methyltransferases，MTase）會(huì)引起不同的異常DNA甲基化。因此研究DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性及其抑制

3、劑對(duì)臨床診斷和治療具有重要的意義。本論文以研究DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性為目的，構(gòu)建了基于AuNPs的比色傳感器，主要包括以下三部分內(nèi)容：1、概述了DNA甲基化及AuNPs比色傳感器。DNA甲基化是一種常見(jiàn)的表觀遺傳修飾，它在原核和真核細(xì)胞中都有重要作用。DNA甲基化對(duì)正常細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程，如細(xì)胞分化、轉(zhuǎn)錄沉默、基因調(diào)控、X染色體失活和一些其它過(guò)程都有極大影響。目前，研究DNA甲基化主要是研究DNA甲基轉(zhuǎn)移酶及其抑制劑。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶分析及其

4、抑制劑篩選的方法多種多樣。基于AuNPs的比色傳感器，憑借AuNPs的生物親和性，表面易于修飾，團(tuán)聚前后顏色變化明顯等優(yōu)勢(shì)被廣泛應(yīng)用于生物檢測(cè)。2、構(gòu)建了一種基于AuNPs的比色傳感器用于直接分析M.SssI活性。實(shí)驗(yàn)以精心設(shè)計(jì)的發(fā)夾DNA（HPI）為甲基化基質(zhì)，以修飾在AuNPs表面上的短鏈DNA為探針，通過(guò)DNA雜交作用使AuNPs發(fā)生團(tuán)聚，并對(duì)不同濃度的M.SssI有很好的響應(yīng)。本方法對(duì)M.SssI響應(yīng)的線(xiàn)性范圍為250UmL，最

5、低檢測(cè)限為0.84UmL。我們建立的AuNPs比色法直接檢測(cè)M.SssI活性的方法，具有操作簡(jiǎn)單、選擇性好、無(wú)需標(biāo)記等特點(diǎn)。3、構(gòu)建了一種基于鏈取代放大技術(shù)的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性比色檢測(cè)方法。首先設(shè)計(jì)一個(gè)頸部含有5CCGG3序列的發(fā)夾DNAI(HPI)，它能被CpG甲基轉(zhuǎn)移酶M.SssI和HpaII限制性?xún)?nèi)切酶識(shí)別。發(fā)生甲基化的HPI能與溶液中其它DNA、酶共存，然而未甲基化的HPI則被剪切成單鏈DNA（ssDNA）碎片。ssDNA碎片