高爾基體相關(guān)堆疊蛋白的PDZ結(jié)構(gòu)域的初步晶體學(xué)結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、GRASP55和GRASP65是同一家族包含PDZ結(jié)構(gòu)域(PDZ domain)的兩個(gè)高度同源的蛋白，GRASP55定位于高爾基中間膜囊而GRASP65則位于高爾基順面，這樣的定位可能說明這兩個(gè)蛋白在不同的扁平囊起堆疊作用。高爾基體是一類非常重要的細(xì)胞器，是蛋白質(zhì)修飾、分選和水解、加工以及轉(zhuǎn)運(yùn)分泌物質(zhì)的場所。而其中高爾基體堆層的形成對高爾基體行使定位和酶功能起著至關(guān)重要的作用。在高爾基堆層形成中起作用的蛋白，一類就是介導(dǎo)有絲分裂后扁平囊

2、重生的蛋白如NSF、P115等；而另一類就是在形成堆疊層中起關(guān)鍵作用的GRASP55和GRASP65蛋白。NSF依賴的扁平囊重生主要靠giantin-P115-GM130栓鏈結(jié)構(gòu)。而在高爾基堆層中關(guān)鍵的兩個(gè)蛋白GRASP55和GRASP65的堆疊作用機(jī)制至今未有報(bào)道，這個(gè)特殊性使其成為很好的研究對象。
　　 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)GRASP55&GRASP65的全長極易降解為N端的一小段，且GRASP55 N端的這一段性質(zhì)要好于GRASP6

3、5。且經(jīng)過二級結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn)二者的N端都含有PDZ結(jié)構(gòu)域，通常PDZ結(jié)構(gòu)域使蛋白能夠相互作用，如果能夠得到這個(gè)功能域的結(jié)構(gòu)，就能對了解堆疊作用的機(jī)制起到幫助。最終得到GRASP55N端的母體晶體數(shù)據(jù)，但在硒代蛋白質(zhì)晶體中因?yàn)槲姆闯Ｉ⑸湫盘柌粡?qiáng)，導(dǎo)致數(shù)據(jù)不好，無法解析其結(jié)構(gòu)。目前正在積極構(gòu)建甲硫氨酸點(diǎn)突變，期望通過引入多個(gè)甲硫氨酸來增強(qiáng)信號，能夠得到較好的數(shù)據(jù)，完成三維結(jié)構(gòu)的分析。
　　 本研究選擇這兩個(gè)相似的同家族蛋白，通過蛋白