人TCP11a、ZNF313基因在大腸桿菌中的蛋白表達(dá)及其在小鼠和人睪丸中的免疫組織化學(xué)分析.pdf

1、為了在蛋白質(zhì)水平研究這些基因在睪丸組織的表達(dá)情況,我們將TCP11基因和ZNF313基因克隆到大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),并利用表達(dá)的蛋白制備抗體,進(jìn)行組織化學(xué)分析,以期了解這些基因在睪丸組織中的表達(dá)狀態(tài),對(duì)其功能進(jìn)行進(jìn)行推測(cè).第一部分:人受精促進(jìn)肽受體TCP11a基因的蛋白表達(dá)及細(xì)胞組織分布 人TCP11基因編碼人受精促進(jìn)肽受體,該基因存在多個(gè)剪切體.我們選擇剪切體TCP11a基因進(jìn)行表達(dá),制備抗體以研究TCP11蛋白在睪丸及精細(xì)胞上的分布.

2、通過(guò)PCR等分子克隆技術(shù),我們將TCP11a基因克隆到pBV220表達(dá)載體上,通過(guò)DNA測(cè)序及表達(dá)產(chǎn)物的N-端測(cè)定證實(shí)了克隆基因表達(dá)產(chǎn)物的正確性.然后我們還對(duì)工程菌TCP11a蛋白的表達(dá)條件進(jìn)行了研究,使TCP11a蛋白在工程菌中高效表達(dá).并利用表達(dá)蛋白制備的抗體進(jìn)行了組織化學(xué)分析.在上述工作基礎(chǔ)上,運(yùn)用生物信息分析方法,對(duì)TCP11基因及TCP11a蛋白進(jìn)行了深入分析.第二部分:人精子發(fā)生相關(guān)基因——ZNF313在大腸桿菌中的克隆表達(dá)

3、及組織分布 鋅指蛋白是一類(lèi)廣泛存在于動(dòng)植物及人類(lèi)的DNA結(jié)合蛋白.由于能選擇性地結(jié)合各種DNA和RNA序列,它們?cè)诨虻谋磉_(dá)調(diào)控中起著十分重要的作用.C2H2和C3HC4鋅指是較為常見(jiàn)的兩種鋅指結(jié)構(gòu)域,但很少同時(shí)存在于同一個(gè)鋅指蛋白.而我們克隆表達(dá)的ZNF313蛋白卻同時(shí)含有這兩種結(jié)構(gòu)域.利用PCR方法,將人ZNF313基因克隆到pET-32(a)載體上,使之以融合蛋白形式表達(dá).在DNA序列測(cè)定、蛋白N-端序列測(cè)定證實(shí)了克隆表達(dá)的正確性