復(fù)合養(yǎng)殖模式下不同來源氣單胞菌對苯扎溴銨的藥物敏感性及季銨鹽類耐藥基因分析.pdf

1、氣單胞菌（Aeromonas spp.）是水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中常見的條件致病菌，能夠引起細(xì)菌性疾病的爆發(fā)，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。苯扎溴銨消毒劑有著抗菌譜廣、有效濃度低、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，可以用于氣單胞菌病的防治，它也是“農(nóng)業(yè)部1435號公告”中，獲得批準(zhǔn)在水產(chǎn)生產(chǎn)中使用消毒劑之一。本研究對復(fù)合養(yǎng)殖模式下不同來源的氣單胞菌進(jìn)行了苯扎溴銨藥物敏感性測試和消毒劑耐藥基因檢測，以期了解不同來源氣單胞菌對苯扎溴銨的敏感性和消毒劑耐藥基因攜帶情況

2、，為苯扎溴銨在水產(chǎn)養(yǎng)殖中科學(xué)、有效的應(yīng)用提供參考。
　　以標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸桿菌（Escherichia coli ATCC25922）和嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila ATCC7966）為受試菌株，按照美國臨床與實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）的微量肉湯稀釋法的操作方法，測定不同菌液濃度和不同M-H（水解酪蛋白）肉湯濃度下的最小

3、抑菌濃度（Minimal Inhibitory Concentration，MIC）及最小殺菌濃度（Minimal Bactericidal Concentration，MBC）。結(jié)果顯示：細(xì)菌接種濃度在0.5×103CFU/mL～0.5×108CFU/mL之間變化時，受試菌株的MIC值隨細(xì)菌濃度變化的差異不明顯。當(dāng)MH肉湯濃度在10％～100%之間變化時，MIC值隨肉湯濃度變化的差異性亦不明顯。因此本研究采用CLSI推薦的微量肉湯稀釋

4、法（96孔板法）（介質(zhì)為M-H肉湯，而每孔中的菌液終濃度為0.5×106CFU/mL）作為進(jìn)一步開展藥物敏感性實驗的方法。
　　2013年06月從廣東省佛山市某一豬-魚復(fù)合養(yǎng)殖魚塘采集樣品，共篩選分離到121株氣單胞菌，分別來源豬糞（64株），池塘水（20株）、池塘底泥（14株）及魚體組織（23株）。采用微量肉湯稀釋法（96孔板法），對分離的121株菌株進(jìn)行MIC和MBC測定。結(jié)果顯示，苯扎溴銨對大腸埃希氏菌（ATCC25922）

5、的MIC值為8mg/L，對嗜水氣單胞菌（ATCC7966）的MIC值為16mg/L，對豬源受試菌株的MIC值范圍在8～128mg/L，對養(yǎng)殖池塘來源菌株的MIC范圍均在8～64mg/L。苯扎溴銨對豬源受試菌株的MIC50和MIC90值最低，分別為8.9mg/L和30.0mg/L；而魚源受試菌株的MIC50和MIC90值最高，分別為22.3mg/L和39.2mg/L。99.1%的受試菌株MBC/MIC比值≤4。MBC/MIC是表征消毒劑藥

6、效的重要指標(biāo)，表明苯扎溴銨對氣單胞菌仍具有良好的殺菌效果。但苯扎溴銨對受試菌株的MICs顯著大于“農(nóng)業(yè)部1435號公告”中的推薦使用濃度0.1～0.15mg/L。
　　根據(jù)現(xiàn)有的文獻(xiàn)報道，我們選擇了季銨鹽類（Quaternary ammonium compound，qac）耐藥相關(guān)基因中6種常見的qac基因，通過PCR的方法，檢測分析了121株氣單胞菌的季銨鹽耐藥相關(guān)基因。結(jié)果顯示：119株（98.4%）攜帶了qac基因，其中52

7、株（43.0%）攜帶2種qac基因；23株（19.0%）攜帶3種qac基因；25株（20.7%）攜帶4種qac基因；1株（0.8%）攜帶5種qac基因；qacA/B陽性菌株的MIC50、MIC90分別為30.6mg/L、52.9mg/L，qacH陽性菌株的MIC50、MIC90分別為32.0mg/L、64.0mg/L，相較于其它qac基因陽性菌株的MIC50和MIC90高。qacA/B和qacH基因可能與氣單胞菌對苯扎溴銨的抗性產(chǎn)生有關(guān)