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文檔簡介
1、溫和氣單胞菌(Aeromonassobria)屬于嗜溫有動力氣單胞菌,是一種典型的人畜共患條件致病菌。是危害淡水養(yǎng)殖業(yè)的主要病原菌之一。2012年新鄉(xiāng)市郊某斑點叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)養(yǎng)殖場暴發(fā)了以體表和鰭條出血為主要癥狀的疾病,造成了所養(yǎng)斑點叉尾鮰的大量死亡。本研究觀察記錄了患病斑點叉尾鮰的臨床癥狀,從瀕死的病魚體內(nèi)分離獲得優(yōu)勢菌,并對優(yōu)勢菌進(jìn)行了病原生物學(xué)和體外藥物敏感性研究。
從患病斑點叉尾鮰的
2、腹水、肝臟、腎臟、脾臟和腸道取樣,在胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)培養(yǎng)基上劃線分離,純化后得到一批優(yōu)勢菌。對純化的菌株進(jìn)行革蘭氏染色、氧化酶實驗、葡萄糖氧化發(fā)酵實驗、菌體及菌落形態(tài)觀察、弧菌科細(xì)菌生化鑒定系統(tǒng)(第二代GY2-9V系統(tǒng))鑒定,判定純化的菌株屬于氣單胞菌屬細(xì)菌,選取其中XX-1菌株,進(jìn)行后續(xù)研究。根據(jù)已報道的氣單胞菌屬gyrB基因序列設(shè)計引物,對XX-1菌株的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,目標(biāo)條帶經(jīng)回收純化后測序。測序結(jié)果在NCB
3、I中進(jìn)行同源性搜索,進(jìn)化發(fā)多重序列比對和系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析。分子鑒定結(jié)果顯示XX-1菌株為溫和氣單胞菌。
根據(jù)氣單胞菌屬毒力基因的相關(guān)報道設(shè)計引物,采用多重PCR的方法,對XX-1菌株進(jìn)行溶血素(Hem)、外膜蛋白(Omp)、氣溶素(Aer)、絲氨酸蛋白酶(Ahp)、粘附素(Aha)和細(xì)胞興奮性腸毒素(Alt)六種氣單胞菌主要毒力基因檢測,結(jié)果表明:XX-1菌株含有Ahp、Alt、Omp三種毒力基因。
研究XX-
4、1菌株在不同的溫度、pH和鹽度條件下,胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)液體培養(yǎng)基中的生長情況。結(jié)果表明:XX-1菌株可以在20~42℃的溫度范圍內(nèi)生長,最適生長溫度為32℃。在pH為5~9.5的范圍內(nèi)XX-1菌株生長良好,生長的最適pH為7.5。pH小于4和大于11時,XX-1菌株不生長。在低鹽環(huán)境下XX-1生長良好,最適生長培養(yǎng)基中氯化鈉含量為1.5%~2.5%。氯化鈉含量達(dá)到4.5%時,XX-1菌株仍能緩慢生長,大于6.5%時,XX
5、-1菌株不能生長。
采用藥敏紙片法檢測XX-1菌株對29種常用抗生素的體外敏感性,結(jié)果顯示:XX-1菌株對頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松、新霉素、紅霉素、呋喃妥因、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星和恩諾沙星高度敏感,對青霉素G、羧芐青霉素、氨芐西林、阿莫西林、新生霉素、復(fù)方新諾明耐藥。采用二倍稀釋法測得乳酸恩諾沙星對XX-1菌株的體外最小抑菌濃度(MIC)為0.4mg/L,最小殺菌濃度(MBC)為3.2mg/L。乳酸恩諾沙星對X
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