滋養(yǎng)細(xì)胞抗原肽結(jié)合熱休克蛋白70作為新型避孕疫苗在小鼠模型中的研究.pdf

1、目的：
　　近年來(lái)應(yīng)用免疫學(xué)理論與技術(shù)開(kāi)發(fā)新型避孕疫苗已引起了生殖醫(yī)學(xué)家和免疫學(xué)家的共同關(guān)注，然而，目前尚無(wú)高效安全的避孕疫苗。胎盤作為一個(gè)有研究前景的妊娠期間特殊的臨時(shí)器官，認(rèn)為其主要的細(xì)胞——滋養(yǎng)層細(xì)胞可以作為一個(gè)靶向作用目標(biāo)。在本研究中，我們?cè)噲D開(kāi)發(fā)一種避孕的新途徑，以小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，我們應(yīng)用熱休克蛋白70（HSP70）-滋養(yǎng)細(xì)胞抗原肽復(fù)合物誘導(dǎo)母體免疫細(xì)胞的免疫激活，導(dǎo)致母體T細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的免疫攻擊，有效終止妊

2、娠從而避孕。
　　方法：
　　1、體外實(shí)驗(yàn)：
　　HSP70-滋養(yǎng)細(xì)胞抗原肽復(fù)合物與脾臟 T細(xì)胞共培養(yǎng)，設(shè)置對(duì)照組。（1）觀察 T細(xì)胞是否增殖和產(chǎn)生的細(xì)胞因子 IL-2和 IFN-γ水平。（2）通過(guò)比較滋養(yǎng)細(xì)胞抗原肽和不同組織來(lái)源抗原肽的免疫誘導(dǎo)，觀察激活的T細(xì)胞是否具有滋養(yǎng)細(xì)胞特異性。（3）通過(guò)檢測(cè)Y染色體上的UTY和SMCY基因，明確雄性或雌性胚胎來(lái)源的滋養(yǎng)層細(xì)胞，并分別制備相應(yīng)的抗原肽激活T細(xì)胞，檢測(cè)兩種T細(xì)胞對(duì)

3、滋養(yǎng)層細(xì)胞的細(xì)胞毒性，確定滋養(yǎng)層細(xì)胞的何種成分能夠誘導(dǎo)上述的T細(xì)胞的活化。
　　2、動(dòng)物模型：
　?。?）小鼠皮下注射Hsp70-滋養(yǎng)細(xì)胞抗原肽，設(shè)置對(duì)照組。7天后分離小鼠脾T細(xì)胞RT-PCR和real-time PCR方法檢測(cè)細(xì)胞因子的表達(dá)。
　?。?）將雌性BALB/c小鼠接種HSP70-滋養(yǎng)細(xì)胞抗原肽復(fù)合物，然后使其與BALB/c雄性交配，設(shè)置對(duì)照組，觀察兩組的生育情況。
　　3、人源性Hsp70-滋養(yǎng)細(xì)胞

4、抗原肽復(fù)合物的制備與對(duì)T細(xì)胞的活化作用：在足月（38周）妊娠的人類女性（N=6）的胎盤中分離滋養(yǎng)細(xì)胞，同樣的方法制備人源性HSP70滋養(yǎng)細(xì)胞抗原肽復(fù)合物，刺激母體T細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組，觀察細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2是否增殖。
　　結(jié)果：
　　1、我們研究小鼠胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞衍生的抗原肽，體外與HSP70結(jié)合后，該復(fù)合物可在體外和體內(nèi)激活T細(xì)胞。
　　2、活化的T細(xì)胞向Th1型免疫偏離，使特定的滋養(yǎng)細(xì)胞溶解，從而導(dǎo)致妊娠的