熱休克蛋白70在LPS激活的信號通路中的作用.pdf

1、誘導(dǎo)型熱休克蛋白70(Heat Shock Protein 70，HSP70)是HSP70家族的成員，在細(xì)胞周期中對維持細(xì)胞的完整性和正常的生理環(huán)境發(fā)揮著重要的作用。TRAF6(tumor necrosis receptor associated factor 6)是在1996年通過用CD40制成的探針，采用酵母雙雜交的方法篩選得到的。TRAF6是一個重要的信號傳遞因子，在許多生理及病理過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，參與調(diào)節(jié)LPS(Lip

2、opolysacchride，脂多糖)激活的NF-KB信號通路。TRAF6C端的TRAF domain區(qū)域是與相關(guān)受體結(jié)合所必需的，該區(qū)域可分為兩部分：TRAF-C domain及TRAF-N domain，其中TRAF-C domain的氨基酸序列在各家族成員中高度保守，主要是用以調(diào)節(jié)家族成員之間的同源／異源二聚化及與細(xì)胞表面不同受體的連接；TRAF-N domain，由于其是采用coiled-coil構(gòu)型，所以又被稱為coiled-

3、coil domain。此外，在TRAF6的N端還具有Ring finger domain(具有由半胱氨酸和組氨酸構(gòu)成的鋅指結(jié)構(gòu))和Zinc finger domain(調(diào)節(jié)與DNA的結(jié)合以及蛋白之間的相互作用)。NF-rd3屬于Rel蛋白家族成員，主要參與調(diào)解與機體免疫、炎癥反應(yīng)及包括白細(xì)胞粘附有關(guān)的蛋白質(zhì)分子的基因轉(zhuǎn)錄，是一種多功能轉(zhuǎn)錄因子。NF-KB能調(diào)節(jié)多種參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子、粘附分子和蛋白激酶類的基因轉(zhuǎn)錄過程，與炎癥的發(fā)生

4、密切相關(guān)，其活化能夠促進炎癥因子的表達，反過來炎癥因子使NF-κB的活性又進一步增強，從而使炎癥的發(fā)生加重。NF-KB在細(xì)胞質(zhì)中以P50和P65異源二聚體形式與無活性的調(diào)節(jié)亞單位IKB形成復(fù)合物，在刺激因素作用下，細(xì)胞信號傳遞系統(tǒng)發(fā)生一系列生物化學(xué)變化，經(jīng)過一系列磷酸化過程，NF-KB由細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)與靶基因κB部位結(jié)合，調(diào)控特定基因轉(zhuǎn)錄，參與多種生物學(xué)反應(yīng)。外界刺激可以弓l起TRAF6與CD40或TRANCE-R結(jié)合從而激活NF-

5、rd3及MAPKs信號通路。LPS是格蘭氏陰性菌細(xì)胞外膜的主要成分，單核細(xì)胞通過表達多種炎癥因子協(xié)調(diào)對LPS的先天性免疫應(yīng)答。本實驗證明在熱誘導(dǎo)的情況下和穩(wěn)定表達HSP70的RAW264.7細(xì)胞株中HSP70均起到抑制LPS激活的NF-κB信號通路的作用。由于TRAF6在NF-κB信號通路中的調(diào)節(jié)作用和HSP70與TRAF6的結(jié)合提示我們，HSP70可能是通過與TRAF6的結(jié)合對LPS誘導(dǎo)的NF-κB信號通路發(fā)揮作用的。本實驗旨在研究H