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文檔簡介
1、該論文通過基因工程技術(shù),把分別克隆在不同載體中的兩段thaunmatin cDNA片段連接成一個完整的thaumatin cDNA基因—tha,測序證明了結(jié)果的正確性,接著把tha克隆到克隆載體pUC18中,得到了一個克隆載體pUC18-tha.分別用EcoR Ⅰ和HindⅢ雙酶切pUC18-tha和pGEM7zf,用連接酶將tha基因和pGEM7zf連接成一個重組載體pGEM7zf-tha.接著又分別用Xba Ⅰ和Sac Ⅰ雙酶切pG
2、EM7zf和植物表達載體pBⅠ121,把tha基因克隆到pBⅠ121 XbaⅠ和SacⅠ位點之間,置于CaMV35S啟動子調(diào)控之下,構(gòu)建成了thaumatin基因的表達載體pBⅠ121-tha,把pBⅠ121-tha轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404,然后通過農(nóng)桿菌LBA4404用葉盤法轉(zhuǎn)化煙草,得到轉(zhuǎn)基因煙草.提取轉(zhuǎn)基因煙草基因組總DNA,分別用PCR、PCR-Southetn和Southem雜交檢測轉(zhuǎn)基因植株,結(jié)果顯示thaumatin cD
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