植物源PVY抗性基因轉(zhuǎn)化煙草研究.pdf

1、PVY(馬鈴薯Y病毒)最早由Smith于1931年在馬鈴薯上首次發(fā)現(xiàn)，目前世界各地均有報(bào)道，此病毒引起煙草、馬鈴薯、辣椒等多種作物病害。PVY在煙草上引起的病害又稱“脈帶病”，“脈壞死病”等，在世界各煙區(qū)均有發(fā)生，在我國也廣泛存在。PVY近年在我國煙草上的發(fā)生和危害呈急劇上升趨勢(shì)。如何防治與解決PVY病毒病已經(jīng)是當(dāng)前煙草生產(chǎn)面臨的重要問題?？共∮N是重要的手段之一。人們通過常規(guī)育種育成了大量的抗性品種，但存在抗性基因與不良農(nóng)藝性狀連鎖等

2、問題。后來生物技術(shù)的興起為解決這些問題提供了一條可能的途徑。源于同種病毒的不同基因介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因品種大規(guī)模種植時(shí)，它們之間的相互雜交就可能使其后代含有兩種或兩種以上的病毒基因，從而導(dǎo)致抗病性的喪失。還有就是可能產(chǎn)生有毒蛋白，對(duì)人體產(chǎn)生危害。而本研究是將植物源的抗病基因轉(zhuǎn)化到煙草中，既能提高植物抗病性，又能解決轉(zhuǎn)病原物來源基因所引起的生物安全問題，具有很好的發(fā)展前景。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)GenBank中發(fā)表的eif4E CDS序列，設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引

3、物，通過RT-PCR的方法從辣椒的葉片中克隆得到689 bp大小的感病eif4E基因片段。根據(jù)GenBank上發(fā)表的eif4E-pvr2基因的CDS序列，將其與感病eif4E基因進(jìn)行序列比對(duì)，序列比對(duì)結(jié)果表明，這兩個(gè)基因的序列絕大部分是相同的，只有在200 bp和236 bp處的兩個(gè)堿基不同，eif4E-pvr2基因?yàn)锳和G，而eif4E基因都是T。根據(jù)這兩個(gè)基因的序列特點(diǎn)，我們用點(diǎn)突變的方法克隆到了eif4E-pvr2基因。構(gòu)建了ei