款冬花、葉配伍紫菀散的毒性和化學(xué)比較.pdf

1、款冬花具有止咳化痰作用，為中醫(yī)臨床常用藥材，歐洲國家則用款冬葉子代替款冬花發(fā)揮藥效。從藥用資源的角度來看，葉具有產(chǎn)量高且易采收的優(yōu)勢。中醫(yī)具有豐富的科學(xué)內(nèi)涵，臨床用藥的主要特點是配伍取效，《本草經(jīng)集注》、《千金》卷十八、《太平圣惠方》卷八十三、《御藥院方》卷五等均為款冬花、紫菀相須使用。為了便于研究本文選擇款冬、紫菀藥對組成的小復(fù)方。前期課題組研究比較了款冬花、葉配伍紫菀散的藥理活性。本課題繼續(xù)深入比較，為款冬葉能否入藥提供依據(jù)。

2、>　　目的：探明款冬花、葉配伍紫菀散在毒性、化學(xué)成分、體內(nèi)代謝的差異，綜合比較，為款冬葉資源的合理利用奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　方法：款冬花、葉配伍紫菀散的毒性比較：本文以款冬花、葉、紫菀為實驗材料，采用小鼠實驗、斑馬魚實驗對款冬花、葉配伍紫菀散進行毒性比較，通過生化指標、病理切片、核磁代謝組學(xué)技術(shù)找到病變部位及相關(guān)代謝物；款冬花、葉配伍紫菀散化學(xué)比較：采用高分辨液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對款冬花、葉及配伍紫菀散進行了研究，采用靶標和非靶標結(jié)合的指認

3、策略進行化合物鑒定，多元統(tǒng)計和單變量積分方法進行化學(xué)比較；款冬花、葉配伍紫菀散的藥物代謝比較：用高分辨液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測款冬花、葉配伍紫菀散給藥后，大鼠血清所含藥物化學(xué)成分，并對檢測的藥物及其代謝物做半定量分析，尋找二者的差異。
　　結(jié)果：（1）款冬花和葉分別配伍紫菀散的毒性比較。病理切片和生化指標均顯示給藥組小鼠的肝臟發(fā)生了明顯病變，血液和肝臟代謝組學(xué)分析共鑒定15個毒性相關(guān)的生物標志物，涉及氨基酸、脂質(zhì)、嘌呤代謝異常、能量代謝失

4、衡和氧化損傷等病理過程。從本研究所檢測到的內(nèi)源性代謝物的變化程度來看，款冬花復(fù)方給藥后血液中3-HB、丙氨酸、乙酰乙酸鹽以及肝臟中乳酸、醋酸鹽、黃嘌呤等代謝物的變化更大，而款冬葉復(fù)方給藥后血液中纈氨酸、脂質(zhì)、谷氨酸、甘油以及肝臟中琥珀酸、鯊肌醇等代謝物的變化更大。綜合這些代謝物的變化來看，大劑量分別給予花、葉組成的紫菀散復(fù)方對肝臟的毒性影響雖然有所不同，但在毒性強度差異無顯著區(qū)別?？疃?、葉、花配伍紫菀散、葉配伍紫菀散處理斑馬魚幼魚72

5、 h后，0.5 mg/mL濃度下，斑馬魚無肝臟毒性；1.0 mg/mL濃度下，各樣品均導(dǎo)致斑馬魚肝臟熒光面積減小，但各樣品組間差異不顯著；1.5 mg/mL濃度下，款冬花樣品導(dǎo)致斑馬魚肝臟熒光面積減小程度較款冬葉樣品大，但是各樣品處理組幼魚ALT、AST與空白對照組相比均無顯著差異。因此，款冬花、葉、花配伍紫菀散、葉配伍紫菀散在藥物濃度較高時，均顯示肝毒性，但是各組間沒有顯著差異。尿蛋白檢測結(jié)果顯示4個受試樣品未對斑馬魚腎臟產(chǎn)生毒性影響

6、。
　　（2）款冬花、葉的化學(xué)比較。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對款冬花、葉化學(xué)成分比較研究。與本課題組前期研究相比，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)可以更加靈敏的檢測款冬中的次級代謝產(chǎn)物。本研究采用靶標和非靶標結(jié)合的指認策略，結(jié)合文獻報道、標品比對及軟件識別和數(shù)據(jù)庫關(guān)聯(lián)，大大提高了指認效率。一共指認了款冬中43種化學(xué)成分。研究結(jié)果顯示，款冬酮、款冬花素酯等倍半萜類物質(zhì)在花中的含量遠遠高于葉；黃酮類物質(zhì)金絲桃苷、槲皮素在款冬花和葉中含量接近，蘆丁、山柰酚在款冬花中含

7、量高；苯丙素類物質(zhì)，綠原酸、異綠原酸等在葉中的含量高于花中的含量，與之前研究結(jié)果一致。
　?。?）款冬花、葉配伍紫菀散水提物化學(xué)成分分析。通過液質(zhì)聯(lián)用共指認了39種化合物，花配伍紫菀散中含量較高的化合物有黃酮類物質(zhì)蘆丁、山奈酚，倍半萜類物質(zhì)款冬素酯，其它類物質(zhì)纈氨酸、蘋果酸等；葉配伍紫菀散中苯丙素類物質(zhì)綠原酸、隱綠原酸、新綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸C、異阿魏酸、阿魏酸略高于花復(fù)方，黃酮類物質(zhì)金絲桃苷、槲皮素、山奈酚-3-蕓香糖苷

8、、山奈酚-3-O-葡萄糖苷，生物堿類腎形千里光堿、腎形千里光寧的含量顯著高于花配伍紫菀散；其它化合物如腺苷、苯丙氨酸等在葉復(fù)方中含量較高。
　　（4）款冬花、葉配伍紫菀散的藥物代謝比較。采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測體內(nèi)藥物化學(xué)成分，先單獨做全掃描，然后做批量的靶標掃描。在15 min檢測到綠原酸、咖啡酸、二氫咖啡酸葡萄糖醛酸酯，咖啡酸硫酸酯，槲皮素-glc-SO3產(chǎn)物。其中二氫咖啡酸葡萄糖醛酸酯在花配伍紫菀散中含量較高，咖啡酸含量在兩組中

9、相近，其余3種均在葉配伍紫菀散中含量高。在60 min時檢測到腎形千里光堿、千里光寧、山奈酚二葡萄糖醛酸酯、款冬酮一羥基取代物、AstertaroneB-SO3產(chǎn)物。其中款冬酮一羥基取代物在花配伍紫菀散中含量較高，山奈酚二葡萄糖醛酸酯僅存在于花配伍紫菀散中，AstertaroneB-SO3產(chǎn)物在兩組中相近，2個生物堿則在葉配伍紫菀散中含量較高，和體外檢測結(jié)果一致。
　　結(jié)論：本文通過比較款冬花、葉配伍紫菀散的毒性、化學(xué)、藥物代謝等