京尼平促進(jìn)棕色脂肪活化與白色脂肪棕化的作用研究.pdf

1、目的:
　　京尼平是茜草科植物梔子的生物活性物質(zhì)。前期研究結(jié)果顯示，京尼平可通過提高外周組織脂肪分解代謝發(fā)揮降脂減肥的作用。已知棕色脂肪組織(brown adipose tissue，BAT)活化與白色脂肪組織（white adipose tissue，WAT）棕化是機(jī)體產(chǎn)熱增加和能量釋放的重要機(jī)制，京尼平是否通過脂肪組織的活化與棕化發(fā)揮降臘減肥的作用，目前尚無研究報(bào)道。因此，本研究目的是觀察京尼平促進(jìn)棕色脂肪組織活化與白色脂肪組

2、織棕化及其在降脂減肥中的作用。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)分別利用正常小鼠和高脂飲食誘導(dǎo)肥胖小鼠，觀察京尼平促進(jìn)脂肪組織活化與棕化及其在降脂減肥中的作用。
　　1.選取8周齡雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、京尼平給藥組和冷刺激組，其中冷刺激組作為陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)組。京尼平組小鼠給予京尼平處理（15mg/kg.d，ip），連續(xù)9天，正常對(duì)照組用等體積生理鹽水處理。3組小鼠室溫(22±1℃)下四天后，將冷刺激對(duì)照組小鼠置

3、于4℃寒冷環(huán)境中進(jìn)行冷刺激處理5天，其他兩組小鼠繼續(xù)在室溫下分別給予京尼平和生理鹽水處理。檢測(cè)各組小鼠體重、攝食量和體溫變化;采用實(shí)時(shí)定量PCR和Western blotting，分別檢測(cè)脂肪組織中解偶聯(lián)蛋白1(uncoupling protein1，UCP1)基因和蛋白的表達(dá)。
　　2.選取8周齡雄性C57BL/6J小鼠，給予高脂飼料喂養(yǎng)，造模8周后，選取肥胖成模小鼠，隨機(jī)分為食源性肥胖組，京尼平低劑量組（15mg/kg.d，i

4、p）和京尼平高劑量組(30mg/kg.d，ip)。后兩組按照劑量給藥，肥胖組給予等體積生理鹽水處理，連續(xù)10天。檢測(cè)小鼠體重、攝食量和體溫，通過體重、攝食量、Lee’s指數(shù)、體脂率和脂肪細(xì)胞的形態(tài)變化來觀察京尼平的減肥作用。采用實(shí)時(shí)定量PCR和Westem blotting分別檢測(cè)脂肪組織活化與棕化相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.京尼平促進(jìn)正常小鼠棕色脂肪組織活化和白色脂肪組織棕化
　　(1)京尼平組和冷刺

5、激組小鼠白色脂肪濕重下降，與正常對(duì)照組相比均有明顯差異(P＜0.05)。
　　(2)與正常對(duì)照組相比，京尼平組和冷刺激組白色脂肪組織顏色變深，HE染色顯示京尼平組、冷刺激組脂肪細(xì)胞內(nèi)的脂滴變小，數(shù)量增加。
　　(3)與正常對(duì)照組相比，京尼平組小鼠的皮下、內(nèi)臟白色脂肪組織和棕色脂肪組織中的UCP1表達(dá)量增加(P＜0.05)。
　　2.京尼平促進(jìn)食源性肥胖小鼠棕色脂肪組織活化和白色脂肪組織棕化
　　(1)高脂飲食8周

6、后，高脂飲食組小鼠的體重較正常對(duì)照組增加約40％，體脂率約為正常對(duì)照組的3.2倍，Lee's指數(shù)超出正常對(duì)照組約10.35％，達(dá)到食源性肥胖小鼠的模型標(biāo)準(zhǔn)。
　　(2)與食源性肥胖組小鼠相比，京尼平給藥組（低劑量和高劑量）小鼠的體重明顯下降(P＜0.05);體脂率也明顯下降，其中京尼平低劑量組下降33.48％(P＜0.01)，高劑量組下降39.08％(P＜0.001);Lee's指數(shù)同樣明顯下降，其中低劑量組下降5.06％(P＜0

7、.001)，高劑量組下降6.60％(P＜0.01)。
　　(3)食源性肥胖組小鼠葡萄糖耐量下降，小鼠的血糖濃度曲線下面積AUC1pGTT相對(duì)于正常對(duì)照組明顯升高(P＜0.05);京尼平高劑量組小鼠葡萄糖耐量有所改善，小鼠的AUC1pGTT明顯低于食源性肥胖組(P＜0.05)。
　　(4)HE染色結(jié)果顯示，食源性肥胖組小鼠的脂肪細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞內(nèi)脂滴變大。京尼平低劑量組和京尼平高劑量組小鼠脂肪細(xì)胞內(nèi)的脂滴變小，數(shù)量增加。

8、r>　　(5)與正常對(duì)照組相比，食源性肥胖組小鼠棕色、皮下和內(nèi)臟脂肪組織中棕化相關(guān)基因UCP1、過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔助激活物1α(peroxisome proliferator activated receptor coactivator1α，PGC1α)、細(xì)胞死亡誘導(dǎo)DFFA樣效應(yīng)因子（cell death inducing DFFA-like effectorA，CIDEA）、PR結(jié)構(gòu)域蛋白16(PR domain-con