慢性HBV感染者IT期與IC期的肝組織與血清miRNA表達(dá)譜差異研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitis b virus，HBV)感染仍然是全球的一項(xiàng)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題，而乙型肝炎一旦慢性化后，可發(fā)展為肝硬化、重型肝炎、肝衰竭和肝細(xì)胞肝癌。肝組織病理檢查雖是評(píng)估肝臟炎癥和纖維化分級(jí)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但由于其操作的創(chuàng)傷性、判斷的局限性和可能的并發(fā)癥，臨床上應(yīng)用受到較大的限制。目前已有的血清生物標(biāo)志物如HBsAg定量、抗HBc定量、HBcrAg水平以及宿主基因如HLA-Ⅱ等位基因和EHMT2，TCF19基因多態(tài)性等

2、，與慢性乙肝自然史和臨床轉(zhuǎn)歸有明顯相關(guān)，但用于鑒別慢性HBV感染者IT期與IC期仍差強(qiáng)人意。因此臨床上迫切需要能夠用于精準(zhǔn)鑒別慢性HBV感染者IT期與IC期新的可靠的指標(biāo)。
　　近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)微小RNA(microRNA，miRNA)在慢性HBV感染者的PBMC中的表達(dá)譜在HBV感染后的不同免疫階段差異顯著，其有可能是臨床上潛在的鑒別診斷慢性HBV感染者IT期和IC期的新的分子標(biāo)志物。本文從以下幾方面進(jìn)行介紹。
　　第一部分

3、:慢性HBV感染者IT期與IC期肝組織miRNA表達(dá)譜差異分析
　　目的:
　　本實(shí)驗(yàn)擬采用基因芯片技術(shù)檢測(cè)慢性HBV感染者的IT期和IC期在肝組織中miRNA的表達(dá)，并通過(guò)相關(guān)生物信息學(xué)及統(tǒng)計(jì)分析，篩選出與慢性HBV感染者IT期與IC期相關(guān)的特異miRNA，為HBV慢性化機(jī)制提供新理論，為慢性乙肝治療提供新靶點(diǎn)。
　　方法:
　　本實(shí)驗(yàn)選取了2010年10月-2012年8月期間住院行肝穿刺的慢性HBV感染者17

4、例，按照病理檢查結(jié)果，入組IT期9例，IC期8例，并同期納入健康對(duì)照組6例。采用Agilent miRNA基因芯片檢測(cè)了患者的肝組織miRNA。采用SBCAnalysis System生物芯片在線分析系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，參照已發(fā)表miRNA芯片檢測(cè)文獻(xiàn)，將foldchange值＞2或＜1/2定義為miRNA表達(dá)有差異。
　　結(jié)果:
　　與健康對(duì)照組相比，慢性HBV感染者免疫耐受期組的肝組織中差異表達(dá)的 miRNA分子有15個(gè)，

5、其中有9個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)，6個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào);與健康對(duì)照組相比，慢性HBV感染者免疫清除期組的肝組織中差異表達(dá)的miRNA分子有14個(gè)，其中8個(gè)miRNA分子表達(dá)上調(diào)，6個(gè)miRNA分子表達(dá)下調(diào);與慢性HBV感染者免疫耐受期組相比，免疫清除期組肝組織miRNA上調(diào)的有6個(gè)，分別為miRNA-H22、miRNA-188-5p、miRNA-3141、miRNA-4270、miRNA-3675-3p和miRNA-296-5p;下調(diào)的m

6、iRNA分子有1個(gè)，為miRNA-155。
　　結(jié)論:
　　1.慢性HBV感染者的IC期與IT期肝組織中miRNA分子表達(dá)譜存在差異。
　　2.慢性HBV感染者的IC期與IT期肝組織中表達(dá)差異的miRNA分子可能與宿主免疫功能恢復(fù)及對(duì)HBV免疫清除有關(guān)。
　　3.慢性HBV感染者的IC期與IT期肝組織中表達(dá)差異的miRNA分子可能是鑒別診斷慢性HBV感染IC期的新型分子標(biāo)志物。
　　第二部分:血清miRNA

7、表達(dá)譜對(duì)慢性HBV感染者IT期與IC期的診斷價(jià)值
　　目的:
　　本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)收集的IT期和IC期慢性HBV感染者血清，通過(guò)RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)其血清中miRNA的表達(dá)譜，并比較其表達(dá)譜差異，對(duì)差異表達(dá)的miRNA構(gòu)建ROC曲線和計(jì)算診斷效率，為慢性BV感染者IT期與IC期的鑒別提供新的可靠的依據(jù)，以指導(dǎo)慢性HBV感染者的精準(zhǔn)治療。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)選取63例住院治療的慢性HBV感染者，其中IT期組27例，I

8、C期組36例，并同期納入健康對(duì)照組30例。抽提血清中的總RNA，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)血清miRNA。構(gòu)建ROC曲線以評(píng)估m(xù)iRNA的診斷價(jià)值。SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果:
　　1.與健康對(duì)照組相比，慢性HBV感染者免疫耐受期血清中差異表達(dá)的miRNA分子有10個(gè)，其中8個(gè)表達(dá)上調(diào)，2個(gè)表達(dá)下調(diào);與健康對(duì)照組相比，慢性HBV感染者免疫清除期血清中差異表達(dá)的miRNA分子有12個(gè)，其中10個(gè)表達(dá)上調(diào)，2個(gè)表達(dá)下調(diào)

9、;與慢性HBV感染者免疫耐受期相比，免疫清除期血清miRNA上調(diào)2倍以上的有2個(gè)，分別為miRNA-210和miRNA-939。
　　2.ROC曲線分析顯示，血清miRNA-210和miRNA-939用于診斷慢性HBV感染者的IC期的AUC分別為:0.736、0.725;95％置信度區(qū)間(confidence interval，CI)分別為0.612～0.612(p＜0.001)、0.600～0.850(p＜0.002);當(dāng)切點(diǎn)值

10、分別為5.1551和0.2196時(shí)，敏感性分別為0.667、0.722，特異性分別為0.778、0.704;miRNA-210聯(lián)合miRNA-939時(shí)的AUC為0.746，95％CI為0.623～0.869(P＜0.001)，當(dāng)miRNA-210和miRNA-939切點(diǎn)值分別大于5.1551和0.2196時(shí)，其敏感性為0.694，特異性為0.778。miRNA-210聯(lián)合HBV DNA的AUC為0.799，95％CI為0.691～0.9

11、07(p＜0.001)，當(dāng)HBV DNA切點(diǎn)值小于6.313×105，同時(shí)miRNA-210切點(diǎn)值大于5.1551，其敏感性為0.861，特異性為0.630; miRNA-939聯(lián)合HBV DNA的AUC為0.788，95％CI為0.678～0.898(p＜0.001)，當(dāng)HBV DNA切點(diǎn)值小于6.313×105，同時(shí)miRNA-939切點(diǎn)值大于0.2196，其敏感性為0.472，特異性為1.000。
　　結(jié)論:
　　1.