應(yīng)用慢性HBV感染者家系探索HBV基因變異率差異的影響因素.pdf

1、研究背景：慢性乙型肝炎是威脅全球人民健康的主要公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。我國(guó)大陸地區(qū)約有0.93億慢性乙型肝炎病毒( hepatitis B virus，HBV)感染者，約占全世界HBV感染者的1/3。HBV屬于DNA病毒，但由于存在逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，且HBV DNA聚合酶缺乏校正功能，其病毒變異率介于DNA病毒和RNA病毒之間。既往關(guān)于HBV變異率研究中，不同學(xué)者有關(guān)HBV變異率的結(jié)論差別很大，從1.4×10-5到2.38×10-4個(gè)變異/位點(diǎn)/年

2、。HBV變異率差異的原因以及影響因素尚沒(méi)有一個(gè)明確的結(jié)論。本研究對(duì)4組家庭的6對(duì)發(fā)生母嬰傳播的母親和子女血清進(jìn)行HBV全長(zhǎng)擴(kuò)增和測(cè)序，分析母親和子女HBV序列變化并綜合患者臨床特征，初步探討不同患者HBV基因變異率差異的原因。
　　方法：于2013年6月至2014年12月間，就診安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染科的慢性HBV感染者家系患者，選取4組慢性HBV感染者家系共6對(duì)母子為研究對(duì)象，PCR擴(kuò)增HBV全長(zhǎng)序列，分析其基因變異率并探

3、討其與疾病進(jìn)程的相關(guān)性。采用全自動(dòng)生化分析儀，檢測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的水平，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)定性檢測(cè)乙肝五項(xiàng)，熒光定量PCR法檢測(cè)血清中HBV DNA的水平。分析不同家系患者存在是變異及其中的相關(guān)影響因素。
　　結(jié)果：(1)6對(duì)母子感染的HBV病毒均為HBV B基因型，乙肝血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)中，除了第三組家系的子女HBeAg為陰性，其余9名患者均為HBeAg陽(yáng)性患者。肝功能測(cè)定，家系1的母親，其子女（1-1），家系2的兩名

4、子女（2-1和2-2）有異常，其余患者正常。5名患者診斷為慢性乙型肝炎患者，其余5名診斷乙型肝炎病毒攜帶者。
　　（2）進(jìn)化樹(shù)分析：通過(guò)PCR測(cè)序，構(gòu)建基因進(jìn)化樹(shù)。將6對(duì)母子的HBV全長(zhǎng)序列，與A、B、C、D四個(gè)基因型的標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行進(jìn)化樹(shù)分析。同源性高的核苷酸序列相靠近，由進(jìn)化樹(shù)得到，同一家庭的成員，基因序列的同源性高于非同一家庭者，而且10名患者的基因序列與B標(biāo)準(zhǔn)序列的同源性高于其它基因型序列，表明均屬于HBV B基因型。

5、>　?。?）HBV全長(zhǎng)的序列分析：通過(guò)對(duì)每對(duì)母子的核苷酸序列及氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，得到6組患者間HBV核苷酸變異率分別為6.67×10-5、2.83×10-5、2.33×10-5、1.48×10-4、1.83×10-4、1.24×10-4個(gè)變異/位點(diǎn)/年，差異可高達(dá)7.85倍，其中家系內(nèi)HBV變異率差異分別為2.36和6.35倍。免疫耐受期HBV基因變異率2.83×10-5和1.24×10-4個(gè)變異/位點(diǎn)/年，非免疫耐受期HBV基因變異