兩個家蠶淀粉酶基因的特性分析及貓ω型干擾素的表達.pdf

1、1.家蠶淀粉酶基因的克隆、序列分析及表達特征
　　淀粉酶是水解淀粉和糖原酶類的通稱，是家蠶體內(nèi)比較重要的一種消化酶。根據(jù)在家蠶轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中預(yù)測的編碼家蠶淀粉酶的cDNA序列設(shè)計引物，利用 RT-PCR技術(shù)克隆到兩個家蠶淀粉酶基因Bmamy7和 Bmamy5，Bmamy7全長為1608bp，ORF為1512bp，編碼503個氨基酸，具有完整的淀粉酶結(jié)構(gòu)域；Bmamy5具有三個轉(zhuǎn)錄本，我們克隆到轉(zhuǎn)錄本1，全長1196bp，ORF為7

2、38bp，編碼245個氨基酸，但是不具有完整的淀粉酶結(jié)構(gòu)域。構(gòu)建了重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)BL21，IPTG誘導(dǎo)表達，經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測，Bmamy7重組蛋白以包涵體的形式存在，沒有檢測到酶學活性；未檢測Bmamy5重組蛋白的目的條帶。利用Real time PCR技術(shù)對Bmamy7和Bmamy5基因在家蠶5齡3天不同組織的mRNA表達水平進行分析，結(jié)果顯示Bmamy7在家蠶5齡3天中腸和馬氏管組織中均有表達，在中腸組織的表

3、達量較高達3千萬個拷貝/10ngRNA，在馬氏管組織中的表達量較低，只有19萬個拷貝/10ngRNA；Bmamy5只在中腸組織中有表達，表達量為1500萬個拷貝/10ngRNA。
　　2.貓干擾素ω2和ω9表達及活性檢測
　　將優(yōu)化合成的貓ω型干擾素基因FeIFNω2和FeIFNω9克隆到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pVL1393的多角體蛋白基因啟動子下游，與家蠶親本病毒Bm-Bacmid DNA共同轉(zhuǎn)染家蠶BmN細胞進行同源重組，用獲