30325.geobacillusspα淀粉酶基因的克隆、表達(dá)、酶學(xué)性質(zhì)研究及分子進(jìn)化

1、廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文Geobacillusspα淀粉酶基因的克隆、表達(dá)、酶學(xué)性質(zhì)研究及分子進(jìn)化姓名：薛蓓申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：韋宇拓20090701Geobacillusspn一淀粉酶基因的克隆、表達(dá)、酶掌性質(zhì)研究反分子進(jìn)化利用定點(diǎn)飽和突變對(duì)GeobacillusspGXSla一淀粉酶基因進(jìn)行改造，首先是借助計(jì)算機(jī)根據(jù)GeobacillusspGXS1一淀粉酶基因的同源建模三維結(jié)構(gòu)信息，利用ProSa2003軟件根據(jù)

2、能量(knowledge—basedpotentials)最低化原則，計(jì)算機(jī)輔助沒計(jì)確定GeobacillusspGXSla一淀粉酶基岡氨基酸飽和突變位點(diǎn)，通過同源建模分析表明192D、221E和289D三個(gè)位點(diǎn)都是活性中心位點(diǎn)。利用兼并引物對(duì)192，221，289位點(diǎn)的氨基酸分別進(jìn)行飽和突變，篩選到四個(gè)有活力的突變D192A、E221N、E221L和D289L。對(duì)突變酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)的研究表明D192A的最適溫度、最適pH、米氏常數(shù)、比

3、活力和Tm分別為65。C、70、341mg／mL、2839、26978U／mg、75。C；突變酶E221N的最適溫度、最適pH、米氏常數(shù)、比活力和Tm分別為65。C、70、384mg／mL、37064U／mg、77℃；突變酶E221L的最適溫度、最適pH、米氏常數(shù)、比活力和Tm分別為70。C、65、266mg／mL、31825U／mg、775“C；突變酶D289L的最適溫度、最適pH、米氏常數(shù)、比活力和Tm分別為60。C、70、434m