嗜熱菌geobacillussp.pot5a淀粉酶基因的克隆與表達

1、匪平! 基墨河南衙霜大孳碩士學(xué)位論文嗜熱菌G e o b a c i H u s s p ．P O T 5a 一淀粉酶基因的克隆與表達學(xué)科、專業(yè)研究方向申請學(xué)位類別申 請 人指導(dǎo)教師微生物學(xué)微生物遺傳育種理學(xué)碩士楊靈劉國生教援張志芳研究員o o 七年六月A b s t r a c tT h e r m o s t a b l e a - a m y l a s ei s O n e o f t h em o s t i m p o r

2、t a n t m d u s U - m Je m ：y m e ，w h i c hh a s g r e a t ee c o n o m i cv a l u e ，a n dw i d e l yb ew i d e l yu s e d i n m a n y i n d u s t r i a lf i e l d s ，s u c ha sf e r m e n t a t i o n , s u g a rr e f

3、i n i n ga n d S O o n ．．I t i s an w w a y f o rt h ee x p l o i f i o na n d a p p l i c a t i o no fa - a m y l a s et h a ta - a m y l a s e s g e n ef r o mt h e r m o p h i l i cb a c t e r i a b ec l o n e da n d

4、e f f e c t i v e l ye x p r e s s e di nh e t e r o l o g o u sh o s t ．B a c t e r i u ms t r a i nP O T 5 s h o w i n gh i g h e r a c t i v i t yo fa - a m y l a s e w a si s o l a t e df r o m t h es i l t o ft h e

5、r m a la Ⅳi I o m n 峨w h i c hc a n ’t g r o w a tn o r m a l t e m p e r a t u r e ，b u tc a ng r o wa th i g ht e m p e r a t u r eo n l y , ．T h eo p t i m u m g r o w t h t e m p e r a t u r e o f t h e i s o l a t e

6、 w c r e 5 5 - 7 5 “ C ．T h e l 6Sr D N A o f P O T 5 s t r a i n w e r e a m p l i f i e dw i t hu n i v e r s a lp r i m 口o f1 6 Sr R N A 鯽c ．h 吣i d e n t i f i e d a sa s l Ⅺc i c so fG e o b a c i l l u sa c c o r d

7、i n gt o t h ea n a l y s i s o f1 6 S r D N A n u c l e o t i d e s e q u e n c e ，a n d r e c o r d e da sG e o b a c i l l u ss p ．P O T S ．T h e P C R p r i m e rw e r e d e s i g n e da c c o r d i n g t ot h e p u

8、t a t i v ea - a m y l a s e g e n e s e q u e n c eo fG ．k a u s t o p h i l u sI ' 1 T A 4 2 6w h i c hg e n o m es e q u e n c eW C r ek n o w n ，a n dt h e a - a m y l a s eg a n e ( a m y P ) w a sa m p l i f i

9、e df r o mt h eg e n o m e o f G ．S l X P O T 5 u s i n gt h i sp r i m e r ．s e q u e n c ea n a l y s i s i n d i c a t e dt h a tt h e g e n eW a s 1 5 1 5 b pi n f u l ls i z ew i t h5 1 ．3 3 ％e n n t e n to fG + C e

10、 n c o d i n g5 1 4a m i n oa c i d s , a n d t h e p r e d i c t e d m o l e c u l a rw e i g h to fA m y P g e n e W a s c l o n e d t ot h e p r o k a r y o t i c e x p r e s s i o nv e c t o rp E T - 2 2 b ( + ) u n

11、d e r t h ec o n 虹o lo f t h el u cp r o m o l e r ．T h ea m y P a - a m y l a s ew a s e x p r e s s e di nE c o l is W d m B L 2 1i n d u c e d b yI P T G ．B e c a u s e p E T - 2 2 b( 帕i sa f u s i o nV I g C t o r )

12、t h ee x p r e s s i o np r o d u c t w i l lh a v ea 3 ．3 K Ds e g m e n ti na d d i t i o n ．S oa6 3 K D p r o t e i nb o n dw a sm a e u s u r e do nS D S —P A G E ．A c t i v e - s t a l n i n ga n d a c t i v i t y a